Сульфосодержащие гетарилформазаны как перспективные реагенты для гибридных тест-систем

Full Text

Создание гибридных химических тест-систем остается актуальной задачей для сигнального и полуколичественного определения химической загрязненности воды, почвы, воздуха, питания металлами-токсикантами, а также при постановке модельных опытов. Действие оптических тест-систем основано на изменении цвета индикаторной матрицы с закрепленным органическим реагентом (хромогенной функционально-аналитической группировкой) при его взаимодействии с ионами металлов, что позволяет определить их содержание по цветовому оттенку матрицы. Такие гибридные тест-системы особенно востребованы в критических случаях, когда необходимо быстро определить состав объекта окружающей среды без привлечения специализированного оборудования и существенных затрат времени и материальных средств на процедуру анализа.

В настоящее время реализуют три основных метода получения таких тест-систем.

Первый вариант заключается в предварительной иммобилизации (закреплении) реагентов различной структуры на матрицу и последующем взаимодействии полученного таким образом модифицированного сорбента с анализируемым раствором (рис. 1а).

Второй вариант заключается в предварительной сорбции определяемого токсиканта из анализируемого раствора на матрицу и последующей “проявке“ раствором органического реагента (рис. 1б).

Третий вариант состоит в предварительном взаимодействии реагента с ионами металлов непосредственно в анализируемой пробе с последующим извлечением сформированного металлокомплекса выбранным сорбентом (рис. 1в).

 

Рис. 1. Методы получения гибридных тест-систем: вариант 1 (а), 2 (б) и 3 (в)

 

Органические соединения класса гетарилформазанов общей формулы, приведенной на схеме 1, представляют значительный интерес при применении их в качестве хромофорных реагентов благодаря сочетанию единой сопряженной азогидразонной группировки и высокой вариабельности заместителей, вводимых в состав при синтезе [1–5]. Наличие HSO₃-группы в составе реагента обеспечивает растворимость синтезированных сульфосодержащих формазанов в органических растворителях и даже в воде, что позволяет использовать матрицы разной природы, в то время как присутствие гидроксигруппы R₂ способствует проявлению селективности при комплексообразовании.

 

Схема 1. Общая формула исследуемых реагентов

 

Комплексные соединения на основе формазанов давно привлекают внимание исследователей вследствие устойчивой окраски, интенсивность которой сохраняется и в условиях твердофазной реакции. Таким образом, гибридные системы с иммобилизованными формазановыми группировками одновременно выполняют функции сорбентов для концентрирования металлов и аналитических реагентов при определении их содержания.

Следует отметить, что интерес к гибридным методам в последнее время несколько угас, однако задача отыскания возможности определения содержания токсиканта в водных средах просто и быстро без участия высококвалифицированного персонала и применения дорогостоящего оборудования остается нерешенной. Поиск уникальных сочетаний высокочувствительного органического реагента, твердофазной матрицы, на поверхности которой проходят взаимодействие иона металла с реагентом и детектирование образовавшегося комплекса, а также способа взаимодействия функционально-аналитических группировок с аналитом продолжает оставаться актуальной задачей при разработке эффективных гибридных методов.

В течение 15 лет на кафедре физико-химической технологии защиты биосферы Уральского государственного лесотехнического университета ведутся работы по созданию и исследованию разнообразных твердофазных реактивных индикаторных систем (ТРИС) с иммобилизованными гетарилформазанами для обнаружения и определения содержания токсичных металлов в водных средах [3–5]. Для детектирования изменения окраски синтезированных реагентов при взаимодействии с определяемым ионом металла используются спектроскопия отражения, цветометрия, визуальная колориметрия [6].

Данная публикация представляет собой обзор исследований авторов по созданию гибридных твердофазных тест-систем, полученных путем иммобилизации гетарилформазановых функциональных группировок для определения ионов металлов в водных средах.

Твердофазные реактивные индикаторные системы на основе иммобилизованных сульфосодержащих формазанов. Ранее [7–12] на примере анионитов АН-18–10п, АН-20, АН-22, АН-31 в ОН-форме нами отработана методика модификации полимерных твердофазных матриц сульфосодержащими формазанами (вариант 1, рис. 1а) по ионному механизму за счет сил электростатического взаимодействия с получением сорбентов для селективного и комплексного извлечения ионов металлов из водных растворов.

Данный синтетический подход (схема 2) реализован при иммобилизации сульфосодержащих 3-метил-5-бензазолилформазанов различного состава на минеральную полимерную матрицу, в качестве которой использовали силикагель ДИАСОРБ-100-ТА дисперсностью 63–200 мкм с триметиламмониевыми группировками в количестве до 0.32 ммоль/г фирмы “БиоХимМак СТ” (Москва, Россия) [13].

 

Схема 2. Ионный механизм закрепления формазановых группировок на силикагель ДИАСОРБ-100ТА

 

Результатом реализации первого варианта получения тест-систем является снижение подвижности реагента, а перераспределение электронной плотности в молекуле лиганда при иммобилизации на матрицу способствует изменению его комплексообразующей способности и повышению селективности.

Извлечение ионов Cu(II), Co(II), Ni(II), Zn(II), Cd(II), Pb(II) из растворов в результате комплексобразования с иммобилизованными на твердофазный носитель формазановыми группировками практически во всех случаях сопровождается хромогенной реакцией уже при концентрации металла 30 мг/л [13, 14]. Так, при контакте 1-(4-сульфофенил)-5-(бензоксазол-2-ил) содержащего формазан твердофазного индикатора с ионами Ni(II) с содержанием 30–300 мкг/мл при рН 4.0–6.0 фиксируется изменение окраски поверхности сорбента от красной (λ_max = 395 нм) до синей (λ_max = 605 нм, Δλ = 210 нм).

Разработаны методики твердофазно-спектроскопического и тест-определения ионов Ni(II) и Cd(II) иммобилизованными на силикагеле 1-(4-сульфофенил)-5-(бензоксазол-2-ил)- и 1-(2-гидрокси-5-сульфофенил)-5-(бензтиазол-2-ил)формазанами соответственно [15, 16]. Разница в изменении цвета индикатора хорошо определяется визуально и позволяет сделать достоверный вывод о наличии или отсутствии ионов металлов в анализируемом растворе, а также выполнить их полуколичественное определение по шкале сравнения. Определению ионов Ni(II) не мешают Со(II), Pb(II), ионы щелочных и щелочноземельных металлов в соотношении 1:5 [15]. Определению ионов Cd(II) не мешают десятикратные избытки Co(II) и Ni(II) (по массе) [16] (табл. 1).

 

Таблица 1. Аналитические характеристики методик определения содержания металлов в водных средах

Определяемый металл	Реагент	Матрица	Способ взаимодействия (детектирования)*	смин, мкг/см3	ДОС**, мкг/мл	Уравнение градуировочного графика	R2
Ni(II)	1-(4-Сульфофенил)-3-метил-5-(бензоксазол-2-ил)формазан	Силикагель ДИАСОРБ-100-ТА	1 / RGB	30	30–100	Ar =2.222c + 0.141	0.986
			1 / СДО	15		F(R) = 0.011c + 0.005	0.992
Cd(II)	1-(2-Гидрокси-5-сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазан		1 / СДО	0.005	0.005–1.000	F(R) = 0.731c + 0.012	0.998
			1 / RGB	0.05	0.05–1.00	Ar = 0.907c + 0.050	0.980
Ni(II)	1-(4-Сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазан	Силикагель ДИАСОРБ-250-Амин	1 / RGB	1.5	3.0–60	Ar = 2.203с + 2.083	0.983
Ni(II)		ОЖГ	1 / ЭСП 1 / RGB	0.006	0.1–7.2	A = 0.036с + 0.007	0.996
				0.05	0.1–7.0	Ar = 19.140с + 9.285	0.975
Cu(II)				0.004	0.1–7.5	A = 0.054с + 0.008	0.997
				0.05	0.1–7.0	Ar = 17.50с + 11.66	0.984
Cu(II)	1-(4-Сульфофенил)-3-метил-5-(бензилбензимидазол-2-ил)формазан	Тканое полотно — лен	2 / СДО	0.009	0.03–0.8	F(R) = 1.480c — 0.011	0.991
			2 / RGB	0.015	0.03–0.8	Ar = 314.56c + 3.756	0.985
Cu(II)	1-(4-Сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазан	Силикагель ДИАСОРБ-100-ТА	3 / RGB	0.4	0.8–4.0	Ar = 56.030c + 2.774	0.987

* Способы детектирования: СДО – спектроскопия диффузного отражения, ЭСП – электронная спектроскопия в видимой области, RGB – цветометрические характеристики тест-систем в системе RGB.

** Диапазон определяемых содержаний.

 

Нами также реализован вариант индикаторной трубки, заполненной “мокрым“ способом содержащим 1-(2-гидрокси-5-сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазан силикагелем ДИАСОРБ-100-ТА, что позволило понизить предел обнаружения ионов Cd(II) до 0.05 мг/л [16, 17]. Металл определяют по интенсивности окраски реакционной зоны индикаторного сорбента после пропускания через него анализируемого раствора. Определению Cd(II) не мешает присутствие ионов Co(II), Ni(II) в соотношении 1:10.

При функционализации поверхности модифицированного γ-аминопропилтриэтоксисиланом силикагеля ДИАСОРБ-250-Амин фирмы “БиоХимМак СТ” (Москва, Россия) с помощью сульфосодержащих формазанов (схема 3) методом квантово-химических расчетов функционала плотности (B3LYP) с базисом 6–31G^** системы сорбент–сорбат установлено, что данный тип силикагеля обладает большим сродством к незамещенным формазанам, которые прочнее удерживаются поверхностью матрицы, чем в случае использования о-гидроксифенилзамещенных аналогов [18, 19].

 

Схема 3. Ионный механизм закрепления формазановых группировок на силикагель ДИАСОРБ-250-Амин

 

При взаимодействии поверхности силикагеля ДИАСОРБ-250-Амин с иммобилизованными формазанами с водными растворами, содержащими ионы Hg(II), Cu(II), Ni(II), Со(II) и Pd((II), образуются внутрикомплексные соединения, что подтверждается изменением окраски. Цветовые переходы, контрастность которых составляет 90–180 нм и зависит от природы иона-комплексообразователя, наблюдаются уже при начальной концентрации металлов 0.04 мкг/мл [18, 19].

Для изучения цветометрических характеристик матриц в качестве устройства для получения фотографий использовали смартфон S21 Ultra (Samsung, Южная Корея), затем полученное изображение с помощью подключения к компьютеру через дата-кабель USB импортировали в графический редактор GIMP для получения окончательного значения цвета в формате RGB.

В качестве аналитического сигнала Ar использовали цифровые значения интенсивностей зеленого цвета анализируемой пробы. На основе силикагеля ДИАСОРБ-250-Амин с 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазаном разработана тест-система для определения ионов никеля (II) в присутствии ионов ртути (II). В оптимизированных условиях (рН 5.5±0.3) построена визуальная шкала для определения ионов никеля (II) в диапазоне 3–60 мкг/мл, s_r < 0.28, нижняя граница определяемых содержаний — 1.5 мкг/мл. Продолжительность тест-анализа составляет 15 мин., при этом определению Ni(II) не мешают ионы Hg(II) в соотношении 1:100 (по массе) [20].

Весьма удобными при широком практическом применении являются тканые матрицы-носители, характеризующиеся более высокими скоростями установления сорбционного равновесия по сравнению с гранулированными сорбентами и обладающие при этом сопоставимыми значениями сорбционной емкости.

Так, нековалентной иммобилизацией 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(бензилбензимидазол-2-ил)формазана на тканевую матрицу натуральной природы — льняной диск (льняная ткань ГОСТ 15968–2014: целлюлоза — 80%, лигнин — 20%, минеральные вещества) — получена гибридная тест-система для концентрирования и последующего определения ионов Cu(II) [21].

Детектируют либо диффузное отражение при λ_макс = 640 нм, либо (визуально) интенсивность сине-зеленой окраски продукта реакции комплексообразования. Спектры диффузного отражения сорбентов регистрировали на спектрофотометре Specord М-40 фирмы Carl Zeiss (Германия) с приставкой диффузного отражения в виде фотометрического шара в кюветах с толщиной слоя исследуемого сорбента 3 мм относительно образца сравнения Mg O.

Для оценки аналитического сигнала в спектроскопии диффузного отражения использовали коэффициент диффузного отражения и функцию Кубелки–Мунка, рассчитанную по формуле F(R) = (1 — R)²/2R, где R — коэффициент диффузного отражения. Сорбционно-спектроскопическое определение ионов Cu(II) осуществляли по градуировочному графику в интервале определяемых концентраций 0.03–0.8 мкг/мл с пределом обнаружения 0.015 мкг/мл.

При разработке методик тест-анализа водных объектов особый интерес представляют твердофазные реагенты, полученные на основе оптически прозрачных полимерных материалов. Высокая однородность, большой диапазон значений показателя преломления света, а также отсутствие собственной окраски не только облегчают визуальную оценку изменения окраски твердофазного реагента при их контакте с токсикантами, но и обеспечивают возможность надежной регистрации спектров поглощения с помощью несложных аналитических приборов.

Среди успешно зарекомендовавших себя подобных сорбентов особый интерес в качестве оригинальной среды представляет оптически прозрачный отвержденный желатиновый гель (ОЖГ). Нами методом ИК-фурье-спектроскопии доказано, что функционализация ОЖГ (пищевого листового желатина фирмы “Грин Пак”, Москва, Россия) водорастворимыми формазановыми группировками проходит по ионному механизму за счет сил электростатического взаимодействия, как и в случае описанных ранее минеральных и полимерных матриц.

Так, основными полосами поглощения для желатина являются широкая полоса с максимумом при частоте 3 300 см^-1 (колебания группы –NH), характерные поглощения при частотах 1 660 см^-1 (Амид I, валентные колебания групп СО, CN), 1 540 см^-1 (Амид II, колебания N–H и CN) и 1 230 см^-1 (Амид III).

В качестве аналитической полосы для характеристики вторичной структуры желатина при анализе ИК-спектральных данных наиболее информативной является полоса Амид I. Иммобилизация 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)-формазана в массив желатина приводит к смещению полосы Амид I в низкочастотную область до 1 652 см^-1, полоса поглощения Амид II также сдвигается в область низких частот до 1 539 см^-1.

Необходимо отметить низкочастотный сдвиг полосы пропускания сульфатных групп формазана до 1 228 см^-1. Наблюдаемые сдвиги свидетельствуют о взаимодействии положительно заряженных амидных групп полипептидной цепи желатина с имеющимися в формазане отрицательно заряженными сульфогруппами. При увеличении концентрации 1-(4-сульфофенил)-производного формазана интенсивность полосы увеличивается, а величина сдвига остается постоянной и не зависит от содержания формазана в желатине.

Кроме того, оказалось, что на величину максимального значения сорбционной емкости ОЖГ по отношению к исследуемым реагентам влияет пространственная структура лигандов. Так, а_макс 1-(4-сульфофенил)бензтиазолилпроизводного составляет 32.9 мкмоль/г, что почти в 10 раз больше, чем величина а_макс = 3.44 мкмоль/г при иммобилизации его гидроксифенилсодержащего аналога.

Полученные тест-системы на основе ОЖГ и сульфосодержащих формазанов имеют равномерную красно-оранжевую окраску, интенсивность которой зависит от структурных особенностей формазанов. Так, желатиновые матрицы с иммобилизованными 2-гидроксизамещенными формазанами окрашены слабее, чем при использовании незамещенных сульфосодержащих формазанов.

Оптические характеристики реагентов в ОЖГ принципиально не отличаются от аналогичных характеристик в растворе, что свидетельствует о сходстве состояний реагентов в растворе и желатиновой фазе. Наблюдаемые незначительные смещения длин волн максимального поглощения иммобилизованных реагентов Δλ (до 20–25 нм) обусловлены межмолекулярными взаимодействиями с желатиновым микроокружением и не затрагивают хромофорных систем реагентов.

При исследовании сорбционной способности модифицированного ОЖГ по отношению к ионам Cu(II), Co(II), Ni(II), Zn(II), Cd(II), Pb(II) отмечено, что значительные хромогенные изменения наблюдаются лишь по отношению к ионам Cu(II) и Ni(II). Диапазон линейности градуировочного графика для твердофазно-фотометрического определения никеля (II) с использованием модифицированного ОЖГ на основе 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазана составляет 0.1–7.2 мкг/л, предел обнаружения — 0.006 мкг/л. Определению Ni(II) не мешают Zn(II), Co(II), Cd(II) в соотношении 5:1 (по массе) [22]. Мешающее влияние на аналитический сигнал исследуемого индикатора оказывают ионы Cu(II), поэтому при определении Ni(II) в анализируемые растворы следует вводить в качестве маскирующего компонента аскорбиновую кислоту.

Показано, что при твердофазно-фотометрическом определении меди (II) с использованием модифицированного ОЖГ на основе 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазана линейность градуировочного графика сохраняется в пределах 0.1–7.5 мг/л [23], предел обнаружения составляет 0.004 мкг/л. Определению Cu(II) не мешают Zn(II), Co(II), Ni(II), Cd(II) в соотношении 7:1 (по массе).

Твердофазные реактивные индикаторные системы c предварительным концентрированием определяемого компонента. К сожалению, зачастую функционализация поверхности твердофазных носителей органическими реагентами сопровождается значительным снижением хромофорных и комплексообразующих свойств “закрепленных“ формазанов. В связи с этим в ряде случаев предпочтительнее для создания тест-систем использовать второй вариант получения ТРИС, основанный на предварительном извлечении и концентрировании ионов металлов твердофазным носителем с последующей обработкой растворами формазанов и детектированием элементов непосредственно на твердой фазе по изменению окраски сорбента. Такой подход позволяет выделить следовые концентрации веществ из большого объема солевого раствора сложного состава, снизить пределы обнаружения, что, в свою очередь, повышает точность и чувствительность анализа.

Нами показано [24], что использование в качестве концентраторов-сорбентов тканевых дисков из натурального льна, выпускаемого в соответствии с ГОСТ 20272–98, позволяет определять содержание ионов меди (II) на уровне ниже предельно допустимой концентрации (ПДК). Образцы дисков с сорбированными ионами Cu(II) после реакции с этанольным раствором 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(1-бензилбензимидазол-2-ил)формазана приобретают синий цвет (λ_max = 640 нм), причем увеличение интенсивности окраски пропорционально увеличению концентрации ионов Cu(II).

Линейность градуировочного графика соблюдается в концентрационном интервале Cu(II) 0.03–0.8 мкг/мл. Предел обнаружения составляет 0.009 и 0.015 мкг/мл для твердофазно-спектроскопического и тест-методов соответственно. Определению содержания Cu(II) не мешают 50-кратные избытки Ca(II), Mg(II), Pb(II), Zn(II) и 20-кратные — Cr(III).

Данные гибридные тест-системы апробированы на реальных объектах: природных и дождевых водах, снежном покрове, смыве с листьев деревьев, расположенных вдоль городских магистралей. Показано удовлетворительное совпадение данных визуального определения с результатами количественного анализа в области средних значений стандартной шкалы. Метрологические характеристики свидетельствуют об их правильности и отсутствии систематических погрешностей. Правильность методик доказана методом инверсионной вольтамперометрии и методом введено–найдено.

Твердофазные реактивные индикаторные системы с сорбцией сформированного в растворе комплексного соединения. Использование третьего варианта создания тест-систем позволяет избежать негативного влияния структурных и пространственных факторов, определяющих эффективность сорбции внутрикомплексного соединения на твердофазную матрицу, и при этом уменьшить время развития окраски, повысить селективность, чувствительность и точность измерения аналитического сигнала.

Сульфосодержащие формазаны (см. схему 1) легко взаимодействуют с ионами металлов в растворах с образованием внутрикомплексных соединений с высоким хромогенным эффектом. В результате иммобилизации сформированных формазанатов металлов, например гранулами ДИАСОРБ-100-ТА, минеральная матрица окрашивается в тот же цвет, что и комплексное соединение. Это позволяет проводить визуальный скрининг монокомпонентных по металлам проб воды. Максимум полос поглощения в спектрах диффузного отражения твердофазных комплексных соединений практически совпадают с максимумами поглощения комплексов, полученных в растворе, что свидетельствует о сохранении состава и строения формазанатов металлов при сорбции на поверхность носителя.

В случае использования в качестве лиганда 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(бензоксазол-2-ил)формазана максимальная степень извлечения силикагелем ДИАСОРБ-100-ТА металлов в виде формазанатов при величине рН 5.0±0.5 составляет 98–99%, что превышает почти в два раза данный показатель в случае сорбции ионов металлов на предварительно модифицированный указанными бензазолилформазанами носитель (33–47%).

Стоит отметить, что формазанаты Ni(II), Cu(II), Co(II) извлекаются в течение 5 мин., в то время как максимум сорбции формазанатов Zn(II), Cd(II), Pb(II) достигается через 25 мин. Высокие сорбционные показатели силикагеля по отношению к формазанатам успешно использованы для дробного и коллективного извлечения ионов Cu(II), Co(II), Ni(II), Cd(II), Zn(II), Pb(II) из водных сред [25].

Реализация третьего варианта создания ТРИС позволила расширить круг определяемых ионов металлов. Например, показана возможность определения содержания ионов редкоземельных элементов с пределом обнаружения 5–15 нг/мл [26].

В качестве носителя перспективно использование силикагеля ДИАСОРБ-250-Амин для определения содержания ионов Hg(II), Cu(II) и металлов платиновой группы в природных, сточных водах и технологических растворах. Разработана методика и построена одноцветная визуальная шкала [27] для визуального определения содержания ионов меди (II) с помощью гибридной тест-системы, состоящей из ДИАСОРБ-250-Амин и 1-(4-сульфофенил)-3-метил-5-(бензтиазол-2-ил)формазаната меди (II), в диапазоне 0.8–4.0 мкг/мл при рН 5.0±0.3. Предел обнаружения — 0.4 мкг/мл. Развитию окраски не мешают 10-кратные количества ионов Hg(II), Co(II), Cd(II) и 20-кратные — Sc(III), Y(III), Sm(III), Tb(III), Yb(III), Gb(III).

Стоит отметить, что в случае применения в качестве реагента 1-(4-сульфофенил)-3-изопропил-5-(бензтиазол-2-ил)формазана для достижения равновесия сорбции формазаната меди (II) поверхностью ДИАСОРБ-250-Амин при рН (4.5–5.5)±0.3 требуется 10–15 мин со степенью извлечения 99%, в то время как формазанаты Zn(II) и Cd(II) за указанный промежуток времени извлекаются незначительно — 3 и 6% соответственно, а формазанаты Pb(II), Ni(II) и Co(II) не извлекаются и не мешают определению. Разработанная на основе полученных авторами результатов сорбционно-фотометрическая методика использована при определении меди в природных водах в диапазоне концентраций 0.01–1.0 мг/л [28].

Авторами установлена возможность [29] концентрирования ионов Ni(II) и Zn(II) в виде 1-(2-гидрокси-5-сульфофенил)-3-этил-5-(бензтиазол-2-ил)формазанатов из водных растворов с концентрацией металла 1.8–2.0 мМ с помощью полиакрилонитрильного волокна, наполненного анионитом АВ-17. Контрастность переходов и зависимость интенсивности окраски, развивающейся на поверхности волокна, от концентрации металлов, наблюдаемые при формировании твердофазных формазанатов никеля (II) и цинка (II), позволяют сформировать индикаторную шкалу для их определения в растворе.

***

Представленные результаты по своей значимости и уровню не уступают известным аналитическим системам. Разработанные авторами гибридные тест-системы являются простыми средствами полуколичественного сигнального анализа водных сред, сочетающими максимальную быстроту анализа, удобство применения, наглядность результата и достоверность. По сравнению с известными материалами разработанные нами тест-средства основаны на использовании эффективных аналитических реагентов — водорастворимых сульфосодержащих гетарилформазанов, позволяющих определять индивидуальные экотоксиканты в водных объектах, в том числе и при их совместном присутствии.

About the authors

Т. И. Маслакова

Уральский государственный лесотехнический университет

Email: pervovaig@m.usfeu.ru
Russian Federation, Екатеринбург

И. Г. Первова

Уральский государственный лесотехнический университет

Author for correspondence.
Email: pervovaig@m.usfeu.ru
Russian Federation, Екатеринбург

Т. А. Мельник

Уральский государственный лесотехнический университет

Email: pervovaig@m.usfeu.ru
Russian Federation, Екатеринбург

П. А. Маслаков

Уральский государственный лесотехнический университет

Email: pervovaig@m.usfeu.ru
Russian Federation, Екатеринбург

References

Supplementary files