Исследование белка PCP4 как потенциального опухолевого маркера лейомиомы матки

Цель: Оценка возможной роли белка PCP4 как потенциального опухолевого маркера лейомиомы матки с помощью измерения титра антител к этому белку в сыворотках крови и применимости такой методики для оценки белков как потенциальных вакцинных антигенов.

Материалы и методы: Клонирован фрагмент кДНК, содержащий ген PCP4 из узла лейомиомы, сконструирован продуцент растворимого химерного белка PCP4-GFP на основе E. coli, проведена очистка рекомбинантного белка, после чего он был использован для исследования предельного титра антител в сыворотках крови больных с применением непрямого иммуноферментного анализа. Сыворотки доноров крови (24 образца) отбирали среди пациентов, проходивших лечение в НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова МЗ РФ, давших информированное согласие на участие в исследовании. Для исследования иммунологической активности сывороток в отношении белка 6His-PCP4hs-GFP было сформировано четыре группы пациентов: контрольная группа мужчин; группа женщины без диагностированных миом, у которых в анамнезе имелось пять или более успешно завершившихся беременностей, группа женщин с миомами, также с пятью или более успешно завершившимися беременностями, а также женщины с рецидивирующими миомами.

Результаты: Из кДНК миоматозного узла с драйверной мутацией в гене MED12 была получена экспрессионная конструкция в векторе pRSET-EmGFP, содержащая ген PCP4 и репортерный ген зеленого флуоресцентного белка EmGFP. С помощью данной конструкции, встроенной в геном E. coli, удалось получить белок человека PCP4 в препаративных количествах, достаточных для изучения его реакции с антителами из сывороток крови различных групп пациентов. Наиболее высокую иммунологическую реактивность в отношении белка 6His-PCP4hs-GFP показали сыворотки контрольной группы мужчин, тогда как группы женщин в среднем незначительно отличались друг от друга: минимальное различие выявлено между сыворотками групп 2 и 4, причем реакция сывороток женщин с рецидивирующими миомами оказалась выше, чем сывороток женщин без миом, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей. При сравнении женщин групп 3 и 4 обнаружены статистически значимые различия в значениях оптической плотности, полученных при разведении сывороток 1:1600, 1:3200 и 1:6400, причем реакция сывороток женщин с рецидивирующими миомами оказалась выше, чем сывороток женщин с миомами, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей. После распределения сывороток на три категории по уровню активности было показано, что реакция сывороток мужчин на антиген 6His-PCP4hs-GFP наиболее выражена (доля высокоактивных сывороток 60%), а в группе женщины без миом, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей, доля низкоактивных сывороток составила 44%, что является максимальным показателем по сравнению с другими группами. Для группы женщин с миомами, имевших пять или более успешно завершившихся беременностей, наиболее характерен средний уровень реактивности с антигеном 6His-PCP4hs-GFP: на долю этой категории приходится 75% сывороток, что является максимальным показателем среди всех групп. Наконец, для группы женщин с рецидивирующими миомами характерно равное количество сывороток с высокой средней активностью, что показывает большую склонность пациенток этой группы к выработке антител против PCP4/PEP19 по сравнению с многорожавшими женщинами.

Заключение: Впервые был получен белок PCP4 человека в препаративных количествах, достаточных для изучения его реакции с антителами из сывороток различных групп пациентов. Тестирование показало, что большая часть образцов во всех группах имеет значимые титры антител к PCP4. Активность этих антител варьирует в широких пределах в сыворотках как мужчин, так и женщин. Антитела против PCP4 встречаются чаще у женщин с рецидивирующими миомами, чем у много рожавших женщин, особенно без лейомиом. Таким образом, иммунизация PCP4 вряд ли сопряжена с риском возникновения каких-либо патологий. Титры антител к PCP4 у общей группы многорожавших женщин значимо ниже, чем у мужчин и пациенток с рецидивирующими миомами. Таким образом, использование белка PCP4 в качестве основы для создания профилактической вакцины для защиты от лейомиом нецелесообразно.