Анализ иммунореактивности отдельных В-клеточных эпитопов антигена NS4a вируса гепатита С (Flaviviridae: Hepacivirus: Hepatitis С virus)

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Введение. Хронический гепатит С (ХГС) является распространённым инфекционным заболеванием, существенное ограничение которого ВОЗ связывает с применением новой высокоэффективной противовирусной терапии. Ранее в антигене NS4а вируса гепатита С (ВГС) были выявлены два В-клеточных эпитопа. Было показано, что антитела (АТ) в определенных титрах на протяженный С-концевой эпитоп (1687–1718 а.о.) предсказывают высокую вероятность достижения устойчивого вирусологического ответа (УВО) при стандартной терапии пегилированным интерфероном-α и рибавирином.

Цели работы – анализ иммунореактивности двух В-клеточных эпитопов (серединного и С-концевого) антигена NS4а и выявление возможной ассоциации АТ к ним с достижением УВО после стандартной интерферонотерапии и лечения препаратами прямого противовирусного действия (ПППД) – даклатасвиром и софосбувиром (велпанатом).

Материалы и методы. Исследованы образцы сывороток крови пациентов с ХГС (n = 113), из которых 55 участников получили стандартную интерферонотерапию, 50 – лечение велпанатом, остальным 8 терапия не проводилась. Серединный В-клеточный эпитоп (позиции 24–34 а.о.) NS4a синтезирован твёрдофазным методом, а С-концевой эпитоп (34–54 а.о.) получен генно-инженерным методом. Иммуноферментный анализ (ИФА) сывороток, собранных перед началом лечения, по двум выбранным эпитопам осуществляли согласно общепринятой методике.

Результаты. При анализе сывороток крови пациентов (n = 113) было установлено, что частота выявления антител к С-концевому эпитопу достоверно выше, чем к серединному (р = 0,01). В образцах сыворотки участников, завершивших стандартную интерферонотерапию, установлена ассоциация наличия АТ к С-концевому эпитопу с достижением УВО (р = 0,0245). В сыворотках крови участников, завершивших терапию велпанатом, тоже установлена ассоциация наличия АТ к С-концевому эпитопу с достижением УВО (р < 0,0001). Присутствие АТ к серединному В-эпитопу не было ассоциировано с достижением УВО независимо от применённой терапии.

Обсуждение. Обнаруженное различие в иммунореактивности двух В-клеточных детерминант может быть связано с локализацией ближайших Тh-эпитопов, с чувствительностью антигена NS4a к протеолитическим ферментам и с особенностями презентации эпитопов антигенпрезентирующими клетками. Однако надо отметить малую изученность иммунореактивности серединного В-эпитопа. Хотя ассоциация АТ к С-концевому эпитопу с достижением УВО показана несколькими научными коллективами, детальный молекулярный механизм их влияния на эффективность терапии неясен.

Заключение. При ХГС АТ на С-концевой эпитоп NS4a образуются достоверно чаще, чем к серединной детерминанте. Наличие антител к С-концевому эпитопу является прогностическим признаком большой вероятности достижения УВО независимо от вида терапии и титра антител.

Об авторах

Людмила Ивановна Николаева

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России

Email: l.i.nikolaeva@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-1323-5568

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории генно-инженерных препаратов

Россия, 123098, Москва

Александр Николаевич Белявцев

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России; ФГБОУ ВО «МИРЭА – Российский технологический университет»

Email: belyavcev@mirea.ru
ORCID iD: 0000-0002-6224-1323

младший научный сотрудник лаборатории генно-инженерных препаратов

Россия, 123098, Москва; 119121, Москва

Надежда Григорьевна Шевченко

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России; ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России

Email: dr.nadya@inbox.ru
ORCID iD: 0000-0002-2486-4554

младший научный сотрудник лаборатории генно-инженерных препаратов

Россия, 123098, Москва; 125993, Москва

Майя Денисовна Стучинская

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России

Email: mayastaya@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-8544-7482

лаборант-исследователь лаборатории генно-инженерных препаратов

Россия, 123098, Москва

Евгений Иванович Самохвалов

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России

Email: e_samokh@hotmail.com
ORCID iD: 0000-0002-1941-0996

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории экологии вирусов

Россия, 123098, Москва

Анна Владимировна Дедова

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России

Email: dedova.anna2010@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2491-9324

лаборант-исследователь лаборатории генно-инженерных препаратов

Россия, 123098, Москва

Георгий Витальевич Сапронов

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России; ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России

Email: g_sapronov@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2154-2904

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории генно-инженерных препаратов, доцент кафедры инфекционных болезней 

Россия, 123098, Москва; 125993, Москва

Наталья Сергеевна Шастина

ФГБОУ ВО «МИРЭА – Российский технологический университет»

Email: inosit@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-8382-7262

кандидат химических наук, доцент кафедры биотехнологии и промышленной фармации

Россия, 119121, Москва

Виктор Васильевич Куприянов

ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России; Федеральный исследовательский центр «Фундаментальные основы биотехнологии» Российской академии наук

Автор, ответственный за переписку.
Email: vkoop@biengi.ac.ru
ORCID iD: 0000-0002-8070-5208

старший научный сотрудник лаборатории генно-инженерных препаратов; научный сотрудник лаборатории систем молекулярного клонирования 

Россия, 123098, Москва; 119071, Москва

Список литературы

  1. Чуланов В.П., Пименов Н.Н., Мамонов Н.А., Сагалова О.И., Шестакова И.В., Покровский В.И. Хронический гепатит С как проблема здравоохранения России сегодня и завтра. Терапевтический архив. 2015; 87(11): 5–10. https://doi.org/10.17116/terarkh201587115-10
  2. Daw M.A., El-Bouzedi A.A., Ahmed M.O., Dau A.A., Agnan M.M., Drah A.M. Geographic integration of hepatitis C virus: A global threat. World J. Virol. 2061; 5(4): 170–82. https://doi.org/10.5501/wjv.v5.i4.170
  3. Petruzziello A., Marigliano S., Loquercio G., Cozzolono A., Cacciapuoti C. Global epidemiology of hepatitis C virus infection: An up-date of the distribution and circulation of hepatitis C virus genotypes. World J. Gastroenterol. 2016; 22(34): 7824–40. https://doi.org/10.3748/wjg.v22.i34.7824
  4. Государственный доклад «О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2014 году». Москва; 2015.
  5. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2020: Государственный доклад. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; с. 158. Доступно на: https://36.rospotrebnadzor.ru/documents/public-reports
  6. Smith D.B., Bercher P., Bukh J., Gould E.A., Meyers G., Monath T., et al. Proposal update to the taxonomy of the genera Hepacivirus and Pegivirus within the Flaviviridae family. J. Gen. Virol. 2016; 97(11): 2894–907. https://doi.org/10.1099/jgv.0.000612
  7. Catanese M.T., Uryu K., Kopp M., Edwards T., Andrus L., Rice W.J., et al. Ultrastructural analysis of hepatitis C virus particles. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2013; 110(23): 9505–10. https://doi.org/10.1073/pnas.1307527110
  8. Smith D.B., Bukh J., Kuiken C., Muerhoff A.S., Rice C.M., Stapleton J., et al. Expanded classification of hepatitis C virus into 7 genotypes and 67 subtypes: updated criteria and genotype assignment wed resource. Hepatology. 2014; 59(1): 318–27. https://doi.org/10.1002/hep.26744
  9. Borgia S.M., Hedskog C., Parhy B., Hyland R.H., Stamm L.M., Brainard D.M., et al. Identification of a novel hepatitis C virus genotype from Punjab, India: expanding classification of hepatitis C virus into 8 genotypes. J. Infect. Dis. 2018; 218(11): 1722–9. https://doi.org/10.1093/infdis/jiy401
  10. Pereboeva L.A., Pereboev A.V., Morris G.E. Identification of antigenic sites on three hepatitis C virus proteins using phage-displayed peptide libraries. J. Med. Virol. 1998; 56(2): 105–11. https://doi.org/10.1002/(sici)1096-9071(199810)56:2<105::aid-jmv1>3.0.co;2-c
  11. Chien D.Y., McFarland J., Tabrizi A., Kuo C., Houghton M., Kuo G. Distinct subtypes of hepatitis C virus defined by antibodies directed to the putative core, NS4, and NS5 region polypeptides. In: Nishioka N., Suzuki S., Mishiro S., Oda T., eds. Viral Hepatitis and Liver Disease. Tokyo: Springer-Verlag; 1994: 320-4.
  12. Desombere I., Van Vlierberghe H., Weiland O., Hultgren C., Sällberg M., Quiroga J., et al. Serum levels of anti-NS4a and anti-NS5a predict treatment response of patients with chronic hepatitis C. J. Med. Virol. 2007; 79(6): 701–13. https://doi.org/10.1002/jmv.20846
  13. Orlent H., Desombere I., Hansen B., Van Vlierberghe H., Haagmans B., De Knegt J., et al. Baseline anti-NS4a antibodies in combination with on-treatment quantitative HCV-RNA reliably identifies non responders to peginterferon-ribavirin combination therapy after 4 weeks of treatment. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2010; 22(12): 1443–8. https://doi.org/10.1097/MEG.0b013e32833ef6e3
  14. Falada-Nwulia O., Suares-Cuervo C., Nelson D.R., Fried M.W., Segasl J.B., Sulkowski M.S. Oral direct-acting agent therapy for hepatitis C virus infection: a systematic review. Ann. Intern. Med. 2017; 166(9): 637–48. https://doi.org/10.7326/M16-2575
  15. Mardanova E.S., Blokhina E.A., Tsybalova L.M., Peyret H., Lomonossoff G.P., Ravin N.V. Efficient transient expression of recombinant proteins in plants by the novel pEff vector based on the genome of Potato Virus X. Front. Plant Sci. 2017; 8: 247. https://doi.org/10.3389/fpls.2017.00247
  16. Белявцев А.Н., Мельникова М.В., Шевченко Н.Г., Сапронов Г.В., Вахренев Р.Г., Шастина Н.С., и др. Синтез и анализ свойств иммуногенного фрагмента полипептида NS4А вируса гепатита С. Биоорганическая химия. 2021; 47(3): 341–7. https://doi.org/10.31857/S0132342321030039
  17. Ohno O., Mizokami M., Wu R.R., Saleh M.G., Ohba K., Orito E., et al. New hepatitis C virus (HCV) genotyping system that allows for identification of HCV genotypes 1a, 1b, 2a, 3a, 3b,4, 5a, and 6a. J. Clin. Microbiol. 1997; 35(1): 201–7. https://doi.org/10.1128/jcm.35.1.201-207.1997
  18. Sanger F., Niclein S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977; 74(12): 5463–7. https://doi.org/10.1073/pnas.74.12.5463
  19. Nikolaeva L.I., Blokhina N.P., Tsurikova N.N., Voronkova N.V., Miminoshvili M.I., Braginsky D.M., et al. Virus-specific antibody titres in different phases of hepatitis C virus infection. J. Viral. Hepat. 2002; 9(6): 429–37. https://doi.org/10.1046/j.1365-2893.2002.00369.x
  20. Day C.L., Lauer G.M., Robbins G.K., McGovern B., Wurcel A.G., Gandhi R.T., et al. Broad specificity of virus-specific CD4+ T-helper-cell responses in resolved hepatitis C virus infection. J. Virol. 2002; 76(24): 12584–95. https://doi.org/10.1128/jvi.76.24.12584-12595.2002
  21. Gerlach J.T., Ulsenheimer A., Gruener N.H., Jung M.C., Schraut W., Schirren C.A., et al. Minimal T-cell-stimulatory sequences and spectrum of HLA restriction of immunodominant CD4+ T-cell epitopes within hepatitis C virus NS3 and NS4 proteins. J. Virol. 2005; 79(19): 12425–33. https://doi.org/10.1128/JVI.79.19.12425-12433.2005
  22. Sarwar M.T., Kausar H., Ijaz B., Ahmad W., Ansar M., Sumrin A., et al. NS4A as a marker of HCV history suggests that different HCV genotypes originally evolved from genotype 1b. Virol. J. 2011; 8: 317. https://doi.org/10.1186/1743-422X-8-317
  23. Chang J.C., Seidel C., Ofenloch B., Jue D.L., Fields H.A., Khudyakov Y.E. Antigenic heterogeneity of the hepatitis C virus NS4 protein as modeled with synthetic peptides. Virology. 1999; 257(1): 177–90. https://doi.org/10.1006/viro.1999.9612

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Схема расположения В-клеточных и Т-хелперных (Тh) эпитопов в составе антигена NS4a вируса гепатита С.

Скачать (132KB)
Метаданные

© Николаева Л.И., Белявцев А.Н., Шевченко Н.Г., Стучинская М.Д., Самохвалов Е.И., Дедова А.В., Сапронов Г.В., Шастина Н.С., Куприянов В.В., 2022

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».