Новый подход к анализу клеточного цикла Т-лимфоцитов методом проточной цитометрии

Обложка
  • Авторы: Сайдакова Е.В.1
  • Учреждения:
    1. Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук
  • Выпуск: Том 28, № 3 (2025)
  • Страницы: 363-368
  • Раздел: КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
  • URL: https://journal-vniispk.ru/1028-7221/article/view/319869
  • DOI: https://doi.org/10.46235/1028-7221-17127-NAT
  • ID: 319869

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Способность Т-лимфоцитов к интенсивной пролиферации является основой формирования как естественного, так и поствакцинального иммунитета. Соответственно, нарушение деления Т-клеток может отражаться на восприимчивости человека к заболеваниям и эффективности вакцинации. Подход, который позволит определять не только долю делящихся клеток и активность пролиферации, но и фазы клеточного цикла, значительно расширит возможности исследования причин и механизмов нарушения деления Т-лимфоцитов. Цель – апробировать новый подход к анализу клеточного цикла Т-лимфоцитов разной степени зрелости с использованием проточной цитометрии. Объектом исследования служила периферическая кровь, полученная от здоровых доноров. Мононуклеарные клетки периферической крови выделяли центрифугированием в градиенте плотности диаколла стандартным методом и стимулировали фитогемагглютинином, после чего культивировали в течение 4 суток (37 °С, 5% CO2). Активированные лейкоциты окрашивали витальным красителем LIVE/DEAD Fixable Violet Dead Cell Stain и антителами CD3 BV605, CD4 PE, CD8 BV510, CCR7 PE/Cy7 и CD45RO APC-eF780. Клетки фиксировали и пермеабилизировали, после чего окрашивали антителами к pRb AF488 и pHH3 AF647, а также красителем DAPI. Анализ клеток проводили на проточном цитометре CytoFLEX S. Установлено, что предложенный подход позволяет различать Т-лимфоциты, находящиеся в G0, G1, S, G2 и M-фазах клеточного цикла. Более того, разработанная панель флуоресцентных красителей и антител позволяет одновременно идентифицировать CD4+ и CD8+Т-клетки различной степени зрелости. Так, в пилотном исследовании было установлено количество CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, вступивших в активные фазы клеточного цикла, и особенности их распределения по фазам. Также были выявлены отличия паттернов пролиферации наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, соответствующих клеток центральной и эффекторной памяти, а также терминальных эффекторов. Предложенный метод позволяет проводить комплексный анализ клеточного цикла CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов разной степени зрелости с использованием проточной цитометрии.

Об авторах

Евгения Владимировна Сайдакова

Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук

Автор, ответственный за переписку.
Email: radimira@list.ru
ORCID iD: 0000-0002-4342-5362
SPIN-код: 8927-1127

д.б.н., доцент, заведующая лабораторией молекулярной иммунологии

Россия, г. Пермь

Список литературы

  1. Марченко Д.М., Сайдакова Е.В. Новые маркеры для исследования пролиферации Т-лимфоцитов человека // Вестник Пермского университета. Серия «Биология», 2021. № 4, С. 316-323. [Marchenko D.M., Saidakova E.V. Novel human T-cell proliferation markers. Vestnik Permskogo universiteta. Seriya “Biologiya” = Bulletin of Perm University. Biology, 2021, no. 4, pp. 316-323. (In Russ.)]
  2. Banks H.T., Sutton K.L., Thompson W.C., Bocharov G., Roose D., Schenkel T., Meyerhans A. Estimation of cell proliferation dynamics using CFSE data. Bull. Math. Biol., 2011, Vol. 73, no. 1, pp. 116-150.
  3. Cooper S., Shayman J.A. Revisiting retinoblastoma protein phosphorylation during the mammalian cell cycle. Cell. Mol. Life Sci., 2001, Vol. 58, no. 4, pp. 580-595.
  4. Crosio C., Fimia G.M., Loury R., Kimura M., Okano Y., Zhou H., Sen S., Allis C.D., Sassone-Corsi P. Mitotic phosphorylation of histone H3: spatio-temporal regulation by mammalian Aurora kinases. Mol. Cell. Biol., 2002, Vol. 22, no. 3, pp. 874-885.
  5. Darzynkiewicz Z. Critical aspects in analysis of cellular DNA content. Curr. Protoc. Cytom., 2011, Chapter 7, pp. 721-728.
  6. Kalimuddin S., Tham C.Y.L., Chan Y.F.Z., Hang S.K., Kunasegaran K., Chia A., Chan C.Y.Y., Ng D.H.L., Sim J.X.Y., Tan H.-C., Syenina A., Ngoh A.Q., Hamis N.Z., Chew V., Leong Y.S., Yee J.X., Low J.G., Chan K.R., Ong E.Z., Bertoletti A., Ooi E.E. Vaccine-induced T cell responses control Orthoflavivirus challenge infection without neutralizing antibodies in humans. Nat. Microbiol., 2025, Vol. 10, no. 2, pp. 374-387.
  7. Kim C., Fang F., Weyand C.M., Goronzy J.J. The life cycle of a T cell after vaccination – where does immune ageing strike? Clin. Exp. Immunol., 2017, Vol. 187, no. 1, pp. 71-81.
  8. Motamedi M., Xu L., Elahi S. Correlation of transferrin receptor (CD71) with Ki67 expression on stimulated human and mouse T cells: The kinetics of expression of T cell activation markers. J. Immunol. Methods, 2016, Vol. 437, pp. 43-52.
  9. Rothaeusler K., Baumgarth N. Assessment of cell proliferation by 5-bromodeoxyuridine (BrdU) labeling for multicolor flow cytometry. Curr. Protoc. Cytom., 2007, Chapter 7, Unit 7.31. .
  10. Schmid I., Ferbas J., Uittenbogaart C.H., Giorgi J.V. Flow cytometric analysis of live cell proliferation and phenotype in populations with low viability. Cytometry, 1999, Vol. 35, no. 1, pp. 64-74.
  11. Wang L., Nicols A., Turtle L., Richter A., Duncan C.J., Dunachie S.J., Klenerman P., Payne R.P. T cell immune memory after covid-19 and vaccination. BMJ Med., 2023, Vol. 2, no. 1, e000468. doi: 10.1136/bmjmed-2022-000468.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рисунок 1. Традиционный и предлагаемый подход к анализу клеточного цикла Т-лимфоцитов

Скачать (412KB)

© Сайдакова Е.В., 2025

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».