Новый подход к анализу клеточного цикла Т-лимфоцитов методом проточной цитометрии
- Авторы: Сайдакова Е.В.1
-
Учреждения:
- Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук
- Выпуск: Том 28, № 3 (2025)
- Страницы: 363-368
- Раздел: КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
- URL: https://journal-vniispk.ru/1028-7221/article/view/319869
- DOI: https://doi.org/10.46235/1028-7221-17127-NAT
- ID: 319869
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Способность Т-лимфоцитов к интенсивной пролиферации является основой формирования как естественного, так и поствакцинального иммунитета. Соответственно, нарушение деления Т-клеток может отражаться на восприимчивости человека к заболеваниям и эффективности вакцинации. Подход, который позволит определять не только долю делящихся клеток и активность пролиферации, но и фазы клеточного цикла, значительно расширит возможности исследования причин и механизмов нарушения деления Т-лимфоцитов. Цель – апробировать новый подход к анализу клеточного цикла Т-лимфоцитов разной степени зрелости с использованием проточной цитометрии. Объектом исследования служила периферическая кровь, полученная от здоровых доноров. Мононуклеарные клетки периферической крови выделяли центрифугированием в градиенте плотности диаколла стандартным методом и стимулировали фитогемагглютинином, после чего культивировали в течение 4 суток (37 °С, 5% CO2). Активированные лейкоциты окрашивали витальным красителем LIVE/DEAD Fixable Violet Dead Cell Stain и антителами CD3 BV605, CD4 PE, CD8 BV510, CCR7 PE/Cy7 и CD45RO APC-eF780. Клетки фиксировали и пермеабилизировали, после чего окрашивали антителами к pRb AF488 и pHH3 AF647, а также красителем DAPI. Анализ клеток проводили на проточном цитометре CytoFLEX S. Установлено, что предложенный подход позволяет различать Т-лимфоциты, находящиеся в G0, G1, S, G2 и M-фазах клеточного цикла. Более того, разработанная панель флуоресцентных красителей и антител позволяет одновременно идентифицировать CD4+ и CD8+Т-клетки различной степени зрелости. Так, в пилотном исследовании было установлено количество CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, вступивших в активные фазы клеточного цикла, и особенности их распределения по фазам. Также были выявлены отличия паттернов пролиферации наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, соответствующих клеток центральной и эффекторной памяти, а также терминальных эффекторов. Предложенный метод позволяет проводить комплексный анализ клеточного цикла CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов разной степени зрелости с использованием проточной цитометрии.
Ключевые слова
Полный текст
Открыть статью на сайте журналаОб авторах
Евгения Владимировна Сайдакова
Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук
Автор, ответственный за переписку.
Email: radimira@list.ru
ORCID iD: 0000-0002-4342-5362
SPIN-код: 8927-1127
д.б.н., доцент, заведующая лабораторией молекулярной иммунологии
Россия, г. ПермьСписок литературы
- Марченко Д.М., Сайдакова Е.В. Новые маркеры для исследования пролиферации Т-лимфоцитов человека // Вестник Пермского университета. Серия «Биология», 2021. № 4, С. 316-323. [Marchenko D.M., Saidakova E.V. Novel human T-cell proliferation markers. Vestnik Permskogo universiteta. Seriya “Biologiya” = Bulletin of Perm University. Biology, 2021, no. 4, pp. 316-323. (In Russ.)]
- Banks H.T., Sutton K.L., Thompson W.C., Bocharov G., Roose D., Schenkel T., Meyerhans A. Estimation of cell proliferation dynamics using CFSE data. Bull. Math. Biol., 2011, Vol. 73, no. 1, pp. 116-150.
- Cooper S., Shayman J.A. Revisiting retinoblastoma protein phosphorylation during the mammalian cell cycle. Cell. Mol. Life Sci., 2001, Vol. 58, no. 4, pp. 580-595.
- Crosio C., Fimia G.M., Loury R., Kimura M., Okano Y., Zhou H., Sen S., Allis C.D., Sassone-Corsi P. Mitotic phosphorylation of histone H3: spatio-temporal regulation by mammalian Aurora kinases. Mol. Cell. Biol., 2002, Vol. 22, no. 3, pp. 874-885.
- Darzynkiewicz Z. Critical aspects in analysis of cellular DNA content. Curr. Protoc. Cytom., 2011, Chapter 7, pp. 721-728.
- Kalimuddin S., Tham C.Y.L., Chan Y.F.Z., Hang S.K., Kunasegaran K., Chia A., Chan C.Y.Y., Ng D.H.L., Sim J.X.Y., Tan H.-C., Syenina A., Ngoh A.Q., Hamis N.Z., Chew V., Leong Y.S., Yee J.X., Low J.G., Chan K.R., Ong E.Z., Bertoletti A., Ooi E.E. Vaccine-induced T cell responses control Orthoflavivirus challenge infection without neutralizing antibodies in humans. Nat. Microbiol., 2025, Vol. 10, no. 2, pp. 374-387.
- Kim C., Fang F., Weyand C.M., Goronzy J.J. The life cycle of a T cell after vaccination – where does immune ageing strike? Clin. Exp. Immunol., 2017, Vol. 187, no. 1, pp. 71-81.
- Motamedi M., Xu L., Elahi S. Correlation of transferrin receptor (CD71) with Ki67 expression on stimulated human and mouse T cells: The kinetics of expression of T cell activation markers. J. Immunol. Methods, 2016, Vol. 437, pp. 43-52.
- Rothaeusler K., Baumgarth N. Assessment of cell proliferation by 5-bromodeoxyuridine (BrdU) labeling for multicolor flow cytometry. Curr. Protoc. Cytom., 2007, Chapter 7, Unit 7.31. .
- Schmid I., Ferbas J., Uittenbogaart C.H., Giorgi J.V. Flow cytometric analysis of live cell proliferation and phenotype in populations with low viability. Cytometry, 1999, Vol. 35, no. 1, pp. 64-74.
- Wang L., Nicols A., Turtle L., Richter A., Duncan C.J., Dunachie S.J., Klenerman P., Payne R.P. T cell immune memory after covid-19 and vaccination. BMJ Med., 2023, Vol. 2, no. 1, e000468. doi: 10.1136/bmjmed-2022-000468.
Дополнительные файлы
