Агробактериальная трансформация картофеля Solanum tuberosum L. генетическими конструкциями, содержащими растительный промотор pro-SmAMP1, выделенный из Stellaria media L.

Эффективность генетической трансформации растений определяется выбором генетических конструкций и их регуляторных последовательностей, обусловливающих высокий и стабильный уровень экспрессии гетерологичных генов. Таким образом, актуальная задача растительной биотехнологии - и спользование высокоэффективных растительных промоторов. Выбор промотора определяет не только уровень экспрессии гена, но и эффективность генетической трансформации. Цель настоящего исследования - о ценить взаимное влияние типа экспланта и 5´-делеционных вариантов растительного промотора pro-SmAMP1 на эффективность агробактериальной трансформации картофеля ( Solanum tuberosum L.) сорта Удача. Для анализа регенерационного потенциала сегментов стеблей и листовых эксплантов картофеля провели генетическую трансформацию посредством штамма Agrobacterium tumefaciens AGL0, несущего генетические конструкции, содержащие 5´-делеционные варианты промоторной части гена антимикробного пептида pro-SmAMP1 Stellaria media L. Использовали четыре генетические конструкции на основе растительного бинарного вектора pCAMBIA1381Z, содержащие селективный ген hptII , а также репортерный ген uidA. Оба этих гена находились под контролем различных 5’-делеционных вариантов растительного промотора proSmAMP1 , размер которых варьирует от -442 до -1196 п. н. (-442, -675, -732 и -1196 п. н.) относительно сайта инициации транскрипции. Кроме того, были использованы две конструкции на основе бинарного вектора pCAMBIA1302, содержащие различные делеционные варианты (-442 и -1196 п. н.) промотора pro-SmAMP1 , контролирующие экспрессию маркерного гена gfp . Установлено, что эффективность агробактериальной трансформации зависела от типа используемой генетической конструкции, но не от типа экспланта. Наличие интеграции фрагмента промоторной области гена pro-SmAMP1 , селективного гена hptII , а также отсутствие бактериального гена Vir E подтверждены с помощью молекулярно-генетического анализа (ПЦР). В зависимости от вида генетической конструкции эффективность агробактериальной трансформации варьировала от 2,0 до 7,2 %. Полученные результаты согласуются с ранее проведенными немногочисленными исследованиями, в которых отмечено, что выбор промотора не только определяет уровень экспрессии маркерных генов, но и оказывает существенное влияние на эффективность генетической трансформации.