Молекулярно-биологические и иммуногистохимические особенности недифференцированных плеоморфных сарком

Актуальность. Недифференцированная плеоморфная саркома (НПС) является одним из наиболее распространенных подтипов сарком мягких тканей. Полиморфизм опухолевых клеток и высокая степень злокачественности обуславливают агрессивный потенциал НПС. В связи с редкостью встречаемости и высокой гетерогенностью НПС количество исследований, описывающих клеточный состав и молекулярно-­биологические характеристики, весьма ограничено. Цель работы — оценка клеточного состава и экспрессии генов НПС. Материалы и методы. В исследовании проанализировали биоматериал от 10 пациентов с НПС. В исследовании использовали первичные антитела к CD163 (маркер М2 макрофагов) и Fibroblast activation protein (FAP — маркер фибробластов) и вторичные Caprine-­Anti-­Rabbit IgG HRP. HRP-метки вторичных антител проявляли с помощью DAB. Для оценки микроокружения использовали антитела для автоматизированного ИГХ стейнера BOND-III: CD68‑маркер макрофагов, CD19‑маркер В-лимфоцитов, CD56‑маркер нейроэндокринных опухолей, белок метастазирования, Ki67 антигену-­маркер пролиферации, Bcl‑2‑онкопротеину. Окрашивание на автоматизированном ИГХ стейнере BOND-III проводили по стандартным протоколам. В гомогенизированных образцах опухолевой ткани и перитуморальной области с количеством клеток 10⁶/мл с целью оценки микроокружения опухоли и окружающей ткани проводили цитофлуориметрическое исследование относительного количества CD14+ и CD16+ моноцитов, CD68+ макрофагов, CD86+ M1 макрофагов, CD163+ и CD206+ M2 макрофагов, CD4+ Т-лимфоцитов хелперов и CD45+ лейкоцитов на приборе MACSQuant Analyzer. Методом ПЦР в образцах опухолевой ткани и перитуморальной области определяли уровни экспрессии мРНК HIF1A, VEGF, MMP2, ARG1, NOS2, и EGFR. Для выделения РНК использовали набор RNA Solo, а для обратной транскрипции — MMLV RT Kit. Реакцию амплификации с детектированием в режиме реального времени проводили на Real-­Time амплификаторе DTprime. Результаты и обсуждение. Для НПС характерна экспрессия CD56, FAP, CD68. Среди клеток микроокружения в НПС преобладают макрофаги и CD16‑моноциты. В опухолевых клетках НПС увеличен уровень экспрессии EGFR по сравнению с перитуморальной областью. Уровни экспрессии ARG1, NOS2, HIF1A, VEGF и MMP2 в опухолях имеют индивидуальные различия и не являются специфическими для НПС. Выводы. В ходе исследования были проанализированы клеточный состав и экспрессия генов в образцах НПС. Для оценки клинической значимости каждого из маркеров необходимо дальнейшее наблюдение за пациентами.