Membrane-bound ferriform hemoglobin in nuclear erythrocytes of the sea ruff (Scorpaena porcus, Linnaeus, 1758)

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

The content of the membrane-bound methemoglobin fraction (MtHb) in the nuclear erythrocytes of the sea ruff (Scorpaena porcus, Linnaeus, 1758) was studied in vitro. The spectral characteristics of whole hemolysate, hemolysate after stroma deposition (purified hemolysate), and resuspended stroma were studied. It was found that the proportion of MtHb in the stroma of erythrocytes exceeded 80% (6.20 ± 0.59 µM). The purified hemolysates practically did not contain MtHb (0.5 ± 0.2 µM). The presence of a membrane-bound ferriform did not affect the resistance of erythrocytes to osmotic shock. The osmotic resistance limits determined using the LaSca-TM microparticle laser analyzer (BioMedSystems, Russia) (102–136 mOsm kg–1) coincided with those noted for other bony fish species. The nitrite load (10 mg l–1) caused a significant increase in the MtHb content in the blood. However, the level of the membrane-bound ferriform did not change significantly and amounted to 6.34 ± 1.09 µM (about 95%). This indicates the functional expediency of its presence in this structure. The presence of MtHb in the cytoplasmic membrane of nuclear erythrocytes, apparently, allows cells to neutralize the external oxidative load and the toxic effect of hydrogen sulfide in the bottom layers of water in which the sea ruff lives.

Full Text

ВВЕДЕНИЕ

В сравнении с высшими позвоночными гемоглобины рыб отличаются низкой устойчивостью к окислению [1]. В процессе деоксигенации часть пигмента может переходить в ферри-состояние, сопровождающееся окислением железа гема:

(Fe2+)HbO2 → (Fe3+)Hb + О2–.

Данное соединение неспособно связывать кислород и получило название метгемоглобина (MtHb). Ядерные эритроциты рыб располагают весьма эффективным молекулярным комплексом, действие которого направлено на поддержание гемоглобина в восстановленном состоянии. К нему следует отнести NADH2-зависимую MtHb-редуктазу, которая переносит электрон с NADH на цитохром b5, а затем на MtHb:

NADH + cytb5(Fe3+) → cytb5(Fe2+) +

+ MtHb(Fe3+) → cytb5(Fe3+) + Hb(Fe2+).

Сравнительная оценка показала, что у рыб этот процесс протекает более эффективно, чем у высших позвоночных [2]. В подавлении процессов самоокисления гемоглобина принимает участие и антиоксидантный ферментный комплекс. Активность ряда ферментов (пероксидазы, супероксиддисмутазы) и концентрация восстановителей (GSH) у рыб превышает таковую у человека [3]. Вместе с тем, устойчивость гемоглобинов рыб к окислению оказывается существенно ниже. Уровень MtHb в крови в норме может превышать 10 % [4]. Причина этого до конца не понятна.

Окисленные формы гемоглобина легко встраиваются в мембранные структуры эритроцита [5, 6]. Считается, что в незначительных количествах они способствуют стабилизации клеточного цитоскелета [5]. Осмотические характеристики и процессы перекисного окисления липидов мембранных структур клетки при этом сохраняются в пределах функциональной нормы [6]. Связанный гемоглобин находится в комплексе, содержащем спектрин, анкирин и полосу 4.2, которые являются общими для одного из узлов цитоскелета. При этом он проявляет окислительно-восстановительную активность и способен связываться с лигандами [5]. Доля мембраносвязанного гемоглобина может находиться в пределах 0.5–12 %, что сопоставимо с относительным содержанием MtHb в крови большинства костистых рыб. Это позволяет предположить наличие ассоциации MtHb с мембранными структурами эритроцита у рыб. Проверке данного предположения и посвящена настоящая работа.

Цель исследования – определить долю мембраносвязанного метгемоглобина в эритроцитах морского ерша в норме и условиях окислительных нагрузок (эксперименты in vitro).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Использовали взрослых особей морского ерша (Scorpaena porcus, Linnaeus, 1758) обоих полов (длина тела 12–14 см, вес 90–114 г) в состоянии относительного функционального покоя (стадия зрелости гонад II–III). Рыбу перевозили в аквариальную в пластиковых баках емкостью 60 л с воздушной аэрацией. После транспортировки животных рассаживали в аквариумы, имеющие естественный проток и освещение, и выдерживали в данных условиях в течение 5–7 суток. В работе использовали подвижных, активно питающихся особей. Контроль за температурой и концентрацией кислорода в воде осуществляли при помощи кислородомера ST300D RU (“Ohaus”, США). Перед отбором проб крови, чтобы исключить развитие состояния манипуляционного стресса, в воде аквариума в качестве анестетика растворяли уретан. Эффективные концентрации его для морского ерша были определены ранее [7].

Отбор проб и пробоподготовка

Кровь получали пункцией хвостовой артерии. В качестве антикоагулянта применяли гепарин (Рихтер, Венгрия). Плазму отделяли путем центрифугирования: рефрижераторная центрифуга Eppendorf Centrifuge 5424 R при 845 g. Эритроцитарную массу трижды отмывали от плазмы в среде: 128 мM NaCl, 3 мМ KCl, 1.5 мМ CaCl2, 1.5 мМ MgCl2, 15 мМ трис, 2.2 мМ D-глюкозы (рН 7.8) [8] при 845 g в течение 5 мин. Ее использовали при проведении экспериментов in vitro.

Экспериментальные схемы

Работа была выполнена в 2 этапа. В начале (опыт 1) часть отмытой эритроцитарной массы (1/2 объема) лизировали при помощи фосфатного буфера (0.02 мМ, рН 7.3), прописывали спектры для цельного гемолизата. Строму осаждали при 9400 g в течение 2 минут (очищенный гемолизат). Для надосадочной жидкости повторно прописывали спектры. Строму трижды отмывали в фосфатном буфере, ресуспензировали и прописывали спектры.

Часть (1/2 объема) полученной ранее эритроцитарной массы преинкубировали в среде [8], содержащей 10 мг л-1 нитрита натрия, в течение 30 минут (опыт 2). Затем клетки осаждали и лизировали при помощи фосфатного буфера (0.02 мМ, рН 7.3). Прописывали спектры для цельного и очищенного гемолизата, а также для ресуспензированной стромы, как описано выше.

Спектральный анализ растворов и взвесей

Спектры с полученных гемолизатов и взвесей стромы снимали при помощи двухлучевого спектрофотометра СПЕКС ССП-715 (ЗАО “Спектроскопические системы”, Россия). Расчет относительного содержания oxyHb (HbO2), deoxyHb (Hb) и MtHb проводили по уравнениям [9], рассчитанным для рН 7.3:

[HbO2] = (1.013 A576 – 0.3269 A630 – 0.7353 A560) × 10–4

[Hb] = (1.373 A560 – 0.747 A576 – 0.737 A630)∙× 10–4

[MtHb] = (2.985 A630 + 0.194 A576 – 0.4023 A560) × 10–4.

Осмотическая стойкость эритроцитов

Осмотическую резистентность клеток красной крови оценивали при помощи метода лазерной дифракции. Для количественного описания осмотической хрупкости эритроцитов морского ерша использовались точки 10 % (Н10), 50 % (H50) и 90 % гемолиза (Н90), отражающие осмолярность среды, при которой наблюдается лизис 10 %, 50 % и 90 % клеток в образце. В работе использовали лазерный анализатор микрочастиц LaSca-TM (BioMedSystems, Россия). В обработке полученной информации было задействовано оригинальное программное обеспечение LaSca_32 v.1498. Величина осмолярности растворов контролировалась при помощи криоосмометра OsmoSpecial 1(Италия).

Статистический анализ

При проведении сравнительного анализа применен однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) PAST Version 4.09 software. Статистические сравнения проводились на основе непараметрического U-критерия Манна–Уитни. Графически цифровой материал обработан с использованием стандартного пакета Grapher (версия 11). Результаты представлены как М ± m. Минимальный уровень значимости составлял p < 0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Образцы спектров представлены на рис. 1. У цельных и очищенных гемолизатов они были подобны (рис. 1а, 1б). Отличие состояло лишь в том, что значения экстинкции при 630 нм у первых были несколько выше. Расчеты показали, что содержание MtHb у цельных гемолизатов находилось на уровне 8.23 ± 0.65 мкМ (рис. 2). Центрифугирование образцов при 9400 g снижало эту величину почти в 15 раз (p < 0.001).

 

Рис. 1. Образцы спектров цельных гемолизатов (а), гемолизатов без стромы (б) и ресуспензированной стромы (в) (1 – без нитрита, 2 – с нитритом).

 

Рис. 2. Концентрация отдельных форм гемоглобина в цельных гемолизатах (а), гемолизатах без стромы (б) и ресуспензированной стромы (в) (1 – oxyHb, 2 – deoxyHb, 3 – MtHb).

 

Уровень MtHb в очищенных гемолизатах составлял 0.5 ± 0.2 мкМ. Спектральный анализ ресуспензированной стромы эритроцитов показал, что она более чем на 80 % (6.20 ± 0.59 мкМ) была представлена ферри-формой (рис. 1в, 2). Уровень oxyHb и deoxyHb был невелик: 1.09 ± 0.08 и 0.16 ± 0.04 мкМ соответственно.

Преинкубирование эритроцитарной взвеси в среде [8], содержащей 10 мг л-1 нитрита натрия, значительно увеличивало долю ферри-формы. В спектрах явно повышалась величина экстинкции при 630 нм (рис. 1а, 1б). Содержание MtHb в цельных и очищенных гемолизатах находилось на уровне 45.9 ± 5.09 и 35.9 ± 1.5 мкМ соответственно (рис. 3). Разница составляла около 22 % (p < 0.01). Анализ спектральных характеристик ресуспензированной стромы показал, что она почти на 95 % (6.34 ± 1.09 мкМ) была представлена ферри-формой (рис. 1в, 2). Суммарная фракция oxyHb и deoxyHb не превышала 6 % (0.30 ± 0.07 мкМ). Как видно, доля мембраносвязанной ферри-формы гемоглобина осталась практически без изменений: 6.20 ± 0.59 мкМ (без нитрита) и 6.34 ± 1.09 мкМ (с нитритом) (p > 0.05).

 

Рис. 3. Концентрация отдельных форм гемоглобина в цельных гемолизатах (а), гемолизатах без стромы (B) и ресуспензированной стромы (в) в условиях нитритной нагрузки (1 – oxyHb, 2 – deoxyHb, 3 – MtHb).

 

Присутствие в мембране эритроцитов MtHb допускает их низкую стойкость к осмотическому шоку. Использование метода лазерной дифракции позволило определить границы толерантности клеток красной крови морского ерша к данному фактору (рис. 4). Начало лизиса (Н10) отмечали при 135.5 ± .4 мОсм кг−1. Основная масса клеток (Н50) разрушалась при 117.7 ± 3.9 мОсм кг−1. Завершение лизиса (Н90) происходило при 102.4 ± 4.1 мОсм кг−1. Эти результаты соответствуют диапазону толерантности эритроцитов к осмотическому шоку большинства костистых рыб.

 

Рис. 4. Осмотическая резистентность циркулирующей эритроцитарной массы у морского ерша (Н10 – лизис 10% клеток, Н50 – лизис 50% клеток, Н90 – лизис 90% клеток).

 

Мембраносвязанным формам гемоглобина посвящено сравнительно большое число работ, выполненных в основном на высших позвоночных, – [10–12] и др. Приоритет отдается deoxyHb. Отмечается его способность к взаимодействию с анионтранспортным белком полосы 3 (CDB3), а также спектрином и гликофорином [11]. В основе взаимодействия могут лежать гидрофобные, дисульфидные, электростатические связи [13]. Они могут быть временными и необратимыми [13]. Необратимое взаимодействие характеризуется образованием ковалентных связей, что свойственно в основном окисленным формам гемоглобина (феррил- и оксоферрилгемоглобин, гемихромы, MtHb) [14]. Они индуцируют свободнорадикальное окисление, что сказывается на функциональных характеристиках клеток красной крови: снижение осмотической стойкости [12]. В нашем случае в ресуспензированной строме эритроцитов явно преобладала фракция MtHb. Однако это не влияло на устойчивость эритроцитов к осмотическому шоку. Диапазон лизиса совпадал с нормальными величинами, показанными для других видов костистых рыб [6]. Это позволяет предположить наличие функциональной целесообразности присутствия ферри-формы гемоглобина в цитоплазматических мембранах клеток красной крови.

О функциональной значимости взаимодействия гемоглобина с мембраной эритроцита однозначного мнения нет. Допускается, что оно направлено на стабилизацию липидного бислоя [5]. Определенное значение это может иметь при адаптации к условиям гипоксии. Взаимодействие deoxyHb с CDB3 высвобождает ферменты гликолиза с сайта связывания с CDB3 и переводит их в активное состояние. В клетке усиливаются анаэробные процессы [10]. Показана также способность мембраносвязанного гемоглобина к восстановлению нитрит-ионов и генерации NO, который участвует в регуляции тонуса гладкомышечной стенки сосудов [15]. Эти результаты, однако, не следует экстраполировать на материалы, представленные в настоящей работе, так как речь идет о мембраносвязанном MtHb.

Известно, что эритроциты рыб вступают в прямое взаимодействие с факторами водной среды на уровне респираторных поверхностей. Придонные слои воды, в которых обитает морской ерш, обладают определенной токсичностью. Здесь активно протекают окислительные процессы, возможно локальное образование сероводорода. В этой связи способность клеток красной крови к нейтрализации подобной нагрузки приобретает особое значение. Присутствие в мембране MtHb позволяет перехватывать электроны и нейтрализовать тем самым действие окислителей. Следует принять во внимание, что в отличие от безъядерных эритроцитов высших позвоночных NADH-MtHb-редуктаза у них локализуется именно в цитоплазматической мембране [16]. Такая локализация делает эту систему восстановления MtHb недоступной для действия высокоэффективного антиоксидантного ферментного комплекса ядерного эритроцита [3], что позволяет поддерживать относительно высокий уровень MtHb в клетке.

Особо следует остановиться на токсическом действии сероводорода (H2S), который может присутствовать в придонных слоях воды. Данное соединение ингибирует активность цитохром-с-оксидазы дыхательной цепи митохондрий [17], переводит гемсодержащие белки в сульф-форму [18], подавляет экспрессию транскрипционного фактора, индуцируемого гипоксией (hypoxic inducible factor, HIF) [19]. Без нейтрализации H2S существование организмов в данных условиях оказывается невозможным. Недавно в экспериментах in vitro показана способность MtHb связывать H2S, что не позволяет ему проникать в клетку [20]. Можно предположить, что эта функция для мембраносвязанного MtHb может быть одной из ведущих.

ИСТОЧНИК ФИНАНСИРОВАНИЯ

Работа выполнена в рамках проекта РНФ № 23-24-00061.

СОБЛЮДЕНИЕ ЭТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ

Все процедуры с использованием рыбы были выполнены в соответствии с Директивой Совета Европейских сообществ (2010/63/EU) и одобрены комиссией по биоэтике ФИЦ ИнБЮМ по уходу и использованию животных (протокол № 4/23 от 26.10.2023).

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы данной работы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

×

About the authors

A. A. Soldatov

A.O. Kovalevsky Institute of Biology of the South Seas of the Russian Academy of Sciences; Sevastopol State University

Author for correspondence.
Email: alekssoldatov@yandex.ru
Russian Federation, Sevastopol; Sevastopol

N. E. Shalagina

A.O. Kovalevsky Institute of Biology of the South Seas of the Russian Academy of Sciences

Email: alekssoldatov@yandex.ru
Russian Federation, Sevastopol

V. N. Rychkova

A.O. Kovalevsky Institute of Biology of the South Seas of the Russian Academy of Sciences

Email: alekssoldatov@yandex.ru
Russian Federation, Sevastopol

T. A. Kukhareva

A.O. Kovalevsky Institute of Biology of the South Seas of the Russian Academy of Sciences

Email: alekssoldatov@yandex.ru
Russian Federation, Sevastopol

References

  1. Maestre R., Pazos M., Medina I. Involvement of Methemoglobin (MetHb) Formation and Hemin Loss in the Pro-oxidant Activity of Fish Hemoglobins // J. Agric. Food Chem. 2009. V. 57. № 15. P. 7013–7021.
  2. Jensen F.B., Nielsen K. Methemoglobin Reductase Activity in Intact Fish Red Blood Cells // Comp. Biochem. Physiol. Part A: Mol. & Integ. Physiol. 2018. V. 216. P. 14–19.
  3. Woo S.P.S., Liu W., Au D.W.T., et al. Antioxidant Responses and Lipid Peroxidation in Gills and Erythrocytes of Fish (Rhabdosarga Sarba) upon Exposure to Chattonella Marina and Hydrogen Peroxide: Implications on the Cause of Fish Kills // J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 2006. V. 336. P. 230–241.
  4. Hardig J., Hoglund L. B. Seasonal and Ontogenetic Effects on Methaemoglobin and Reduced Glutathione Contents in the Blood of Reared Baltic Salmon // Comp. Biochem. Physiol. 1983. V. 76A. № 1. P. 27–34.
  5. Welbourn E.M., Wilson M.T., Yusof A., et al. The Mechanism of Formation, Structure and Physiological Relevance of Covalent Hemoglobin Attachment to the Erythrocyte Membrane // Free Rad. Biol. Med. 2017. V. 103. P. 95–106.
  6. Sztiller M., Puchala M., Kowalczyk A., et al. The Influence of Ferrylhemoglobin and Methemoglobin on the Human Erythrocyte Membrane // Red. Rep. 2006. V. 11. № 6. P. 263–271.
  7. Soldatov A.A. Physiological Aspects of Effects of Urethane Anesthesia on the Organism of Marine Fishes // Hydrobiol. J. 2005. V. 41. № 1. P. 113–126.
  8. Tiihonen K., Nikinmaa M. Short Communication Substrate Utilization by Carp (Cyprinus Carpio) Erythrocytes // J. Exp. Biol. 1991. V. 161. № 1. P. 509–514.
  9. Benesch R.E., Benesch R., Yung S. Equations for the Spectrophotometric Analysis of Hemoglobin Mixtures // Anal. Biochem. 1973. V. 55. P. 245–248.
  10. Chu H., Breite A., Ciraolo P., et al. Characterization of the Deoxyhemoglobin Binding Site on Human Erythrocyte Band 3: Implications for O2 Regulation of Erythrocyte Properties // Blood. 2008. V. 111. P. 932–938.
  11. Sega M.F., Chu H., Christian J., et al. Interaction of Deoxyhemoglobin with the Cytoplasmic Domain of Murine Erythrocyte Band 3 // Biochem. 2012. V. 51. P. 3264–3272.
  12. Rifkind J.M., Nagababu E. Hemoglobin Redox Reactions and Red Blood Cell Aging // Antioxidants & Redox Signaling. 2013. V. 18. P. 2274–2283.
  13. Demehin A.A., Abugo O.O., Jayakumar J.R., et al. Binding of Hemoglobin to Red Cell Membranes with Eosin-5-Maleimide-Labeled Band 3: Analysis of Centrifugation and Fluorescence Data // Biochem. 2002. V. 41. P. 8630–8637.
  14. Nagababu E., Mohanty J.G., Bhamidipaty S., et al. Role of Membrane in the Formation of Heme Degradation Products in Red Blood Cells // Life Sci. 2010. V. 86. P. 133–138.
  15. Salhany J.M. Kinetics of Reaction of Nitrite with Deoxy Hemoglobin after Rapid Deoxygenation or Predeoxygenation by Dithionite Measured in Solution and Bound to the Cytoplasmic Domain of Band 3 (SLC4A1) // Biochemistry. 2008. V. 47. P. 6059–6072.
  16. Saleh M.C., McConkey S. NADH-dependent Cytochrome b5 Reductase and NADPH Methemoglobin Reductase Activity in the Erythrocytes of Oncorhynchus Mykiss // Fish Physiol. Biochem. 2012. V. 38. P. 1807–1813.
  17. Cooper C.E., Brown G.C. The Inhibition of Mitochondrial Cytochrome Oxidase by the Gases Carbon Monoxide, Nitric Oxide, Hydrogen Cyanide and Hydrogen Sulfide: Chemical Mechanism and Physiological Significance // J. Bioenerg. Biomembr. 2008. V. 40. P. 533–539.
  18. Bagarinao T. Sulfide as an Environmental Factor and Toxicant: Tolerance and Adaptations in Aquatic Organisms // Aquat. Toxicol. 1992. V. 24. P. 21–62.
  19. Wu B., Teng H., Yang G. Hydrogen Sulfide Inhibits the Translational Expression of Hypoxia-inducible Factor-1α // Br. J. Pharmacol. 2012. V. 167. P. 1492–1505.
  20. Jensen B., Fago A. A Novel Possible Role for Met Hemoglobin as Carrier of Hydrogen Sulfide in the Blood // Antioxidants & Redox Signaling. 2020. V. 32. № 4. P. 258– 265.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download
2. Fig. 1. Spectral samples of whole hemolysates (a), hemolysates without stroma (b) and resuspended stroma (c) (1 – without nitrite, 2 – with nitrite).

Download (186KB)
Indexing metadata
3. Fig. 2. Concentration of individual forms of hemoglobin in whole hemolysates (a), hemolysates without stroma (b) and resuspended stroma (c) (1 – oxyHb, 2 – deoxyHb, 3 – MtHb).

Download (108KB)
Indexing metadata
4. Fig. 3. Concentration of individual forms of hemoglobin in whole hemolysates (a), hemolysates without stroma (B) and resuspended stroma (c) under nitrite load conditions (1 – oxyHb, 2 – deoxyHb, 3 – MtHb).

Download (119KB)
Indexing metadata
5. Fig. 4. Osmotic resistance of circulating erythrocyte mass in black scorpionfish (H10 – lysis of 10% of cells, H50 – lysis of 50% of cells, H90 – lysis of 90% of cells).

Download (55KB)
Indexing metadata

Copyright (c) 2024 Russian Academy of Sciences

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».