Получение первичных клеточных линий глиальных опухолей

Цель. Осуществлено исследование, ориентированное на получение первичных клеточных линий злокачественных опухолей головного мозга с использованием метода эксплантатов. Для исследования отобраны 13 мужчин и женщин в возрасте от 22 до 66 лет.

Материалы и методы. Опухолевый материал больных фрагментировали и помещали в культуральную посуду (флаконы) с полной питательной средой для клеток глиальных опухолей. В течение всего периода культивирования проводили фотофиксацию материала, определение морфологии клеток, а также оценку скорости образования монослоя на нулевом и первом пассажах.

Результаты. В результате было получено тринадцать первичных клеточных линий глиальных опухолей человека: шесть линий глиобластомы, две линии глиобластомы на фоне анапластической астроцитомы, одна линия анапластической олигодендроглиомы, одна линия диффузной астроцитомы, одна линия олигоастроцитомы, одна линия диффузной протоплазматической астроцитомы, одна линия анапластической астроцитомы. В культуре диффузной астроцитомы наблюдали клетки, образующие сеть на дне флакона. В культуре анапластической астроцитомы при конфлюентности 30–50 % были представлены фибробластоподобные клетки, а при конфлюентности 100 % происходило образование монослоя с интимно прилегающими клетками. В культуре олигоастроцитомы наблюдали как фибробластоподобные клетки, так и островки тесно переплетенных веретеновидных клеток. Подобное было характерно и для клеток диффузной протоплазматической астроцитомы. Анапластическая олигодендроглиома в течение первой недели культивирования была представлена преимущественно округлыми клетками с контрастным веществом, которые впоследствии прикреплялись и активно пролиферировали. При конфлюентности 30–80 % наблюдали фибробластоподобные клетки, а при 100 % – плотно прилегающие друг к другу веретеновидные клетки. Культуры глиобластом были представлены различными морфологическими типами клеток: встречались веретеновидные, фибробластоподобные клетки и клетки с длинными отростками, образующие сеть. Культуры глиобластомы на фоне анапластической астроцитомы были представлены сетью клеток с длинными отростками.

На нулевом пассаже скорость образования монослоя 100%-ной конфлюентности составляла от 22 до 85 суток. На первом пассаже клетки достигали полного монослоя в пределах от 4 до 25 суток. На нулевом пассаже дольше всех образцов монослой со 100%-ной конфлюентностью образовывали линии глиобластомы – в среднем 59 суток. Наименьшее время для достижения 100%-ной конфлюентности понадобилось клеткам диффузной астроцитомы, анапластической олигодендроглиомы и глиобластомы на фоне анапластической астроцитомы – 22–24 суток.

Выводы. В работе показано, что метод эксплантатов обеспечивает получение жизнеспособных клеток глиальных опухолей и возможность их дальнейшего культивирования.