Экспрессия гетерологичной ФЕП-карбоксилазы в Methylococcus capsulatus MIR: влияние на ростовые характеристики и аминокислотный состав биомассы метанотрофа

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Methylococcus capsulatus MIR – штамм метанотрофных бактерий, потенциально пригодный для использования в биотехнологии получения кормового белка и других продуктов с добавленной стоимостью из метана. Геномный анализ не выявил у Mc. capsulatus MIR известных путей С3-карбоксилирования, необходимых для восполнения интермедиатов цикла трикарбоновых кислот и полноценного функционирования метаболизма. Ген pepc, кодирующий ФЕП-карбоксилазу у Methylomonas rapida 12, вносили в клетки Mc. capsulatus MIR на плазмиде под контролем промотора средней силы. Экспрессия гетерологичной ФЕП-карбоксилазы в клетках рекомбинантного штамма привела к повышению содержания глутамата, глицина и лизина, однако не привела к увеличению скорости роста культуры. Таким образом, внесение гетерологичной ФЕП-карбоксилазы, осуществляющей реакцию С3-карбоксилирования, способствует повышению пищевой ценности биомассы метанотрофа.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

С. Ю. Бут

ФИЦ Биотехнологии РАН; ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Автор, ответственный за переписку.
Email: sergeybut20063@gmail.com

Институт микробиологии им. С.Н. Виноградского; ИБФМ РАН

Россия, Москва, 119071; Московская обл., Пущино, 142290

О. Н. Розова

ФИЦ Биотехнологии РАН; ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Email: sergeybut20063@gmail.com

Институт микробиологии им. С.Н. Виноградского; ИБФМ РАН

Россия, Москва, 119071; Московская обл., Пущино, 142290

С. В. Чистякова

ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Email: sergeybut20063@gmail.com

ИБФМ РАН

Россия, Московская обл., Пущино, 142290

Д. С. Потапова

Тульский государственный университет

Email: sergeybut20063@gmail.com
Россия, Тула, 300012

В. Н. Хмеленина

ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Email: sergeybut20063@gmail.com

ИБФМ РАН

Россия, Московская обл., Пущино, 142290

И. И. Мустахимов

ФИЦ Биотехнологии РАН; ФИЦ “Пущинский научный центр биологических исследований РАН”

Email: sergeybut20063@gmail.com

Институт микробиологии им. С.Н. Виноградского; ИБФМ РАН

Россия, Москва, 119071; Московская обл., Пущино, 142290

Список литературы

  1. Розова О. Н., Хмеленина В. Н., Мустахимов И. И., Бут С. Ю., Троценко Ю. А. Свойства рекомбинантного малик-фермента у аэробного метанотрофа Methylosinus trichosporium // Биохимия. 2019. T. 84. C. 532–539.
  2. Rozova O. N., Khmelenina V. N., Mustakhimov I. I., But S. Yu., Trotsenko Yu.A . Properties of malic enzyme from the aerobic methanotroph Methylosinus trichosporium // Biochemistry (Moscow). 2019. V. 84. Р. 390‒397.
  3. Хмеленина В. Н., Бесчастный А. П., Гаязов А. П., Троценко Ю. А. . Влияние пирофосфата на рост и метаболизм Methylomonas methanica // Микробиология. 1994. Т. 63. С. 188–193.
  4. B uch A., Archana G., Naresh Kumar G. Heterologous expression of phosphoenolpyruvate carboxylase enhances the phosphate solubilizing ability of fluorescent pseudomonads by altering the glucose catabolism to improve biomass yield // Bioresour Technol. 2010. V. 101. P. 679–687.
  5. But S. Y., Egorova S. V., Khmelenina V. N., Mustakhimov I. I. Malyl-CoA lyase provides glycine/glyoxylate synthesis in type I methanotroph // FEMS Microbiol. Lett. 2020. V. 367. Art. fnaa207.
  6. But S. Y., Egorova S. V., Khmelenina V. N., Trotsenko Y. A. Serine-glyoxylate aminotranferases from methanotrophs using different C1-assimilation pathways // Antonie van Leeuwenhoek. 2019. V. 112. P. 741–751.
  7. Hanson R., Hanson T. Methanotrophic bacteria // Microbiol. Rev. 1996. V. 60. P. 439–471.
  8. Henard C. A., Smith H., Dowe N., Kalyuzhnaya M. G., Pienkos P. T., Guarnieri M. T. Bioconversion of methane to lactate by an obligate methanotrophic bacterium // Sci. Rep. 2016. V. 6. Art. 21585.
  9. Koffas M. A.G., Jung G. Y., Stephanopoulos G. Engineering metabolism and product formation in Corynebacterium glutamicum by coordinated gene overexpression // Metab. Eng. 2003. V. 5. P. 32–41.
  10. Oshkin I. Y., Danilova O. V., But S. Y., Miroshnikov K. K., Suleimanov R. Z., Belova S. E., Tikhonova E. N., Kuznetsov N. N., Khmelenina V. N., Pimenov N. V., Dedysh S. N. Expanding characterized diversity and the pool of complete genome sequences of Methylococcus species, the bacteria of high environmental and biotechnological relevance // Front. Microbiol. 2021. V. 12. Art. 756830.
  11. Oshkin I. Y., Suleimanov R. Z., Khmelenina V. N., Mardanov A. V., Pimenov N. V. , Dedysh S. N. Complete genome sequence of Methylococcus capsulatus MIR, a methanotroph capable of growth on methanol // Microbiol. Resour. Announc. 2022. V. 11. Art. e0054222.
  12. Rumah B. L., Claxton Stevens B. H., Yeboah J. E., Stead C. E., Harding E. L., Minton N. P., Zhang Y. In vivo genome editing in type I and II methanotrophs using a CRISPR/Cas9 system // ACS Synth. Biol. 2023. V. 12. P. 544–554.
  13. Schaefer H., Mikaloff Fletcher S. E., Veidt C., Lassey K. R., Brailsford G. W., Bromley T. M., Dlugokencky E. J., Michel S. E., Miller J. B., Levin I., Lowe D. C., Martin R. J. , Vaughn B. H., White J. W.C. A 21 st -century shift from fossil-fuel to biogenic methane emissions indicated by 13 CH 4 // Science. 2016. V. 352. P. 80–84.
  14. Strong P. J., Kalyuzhnaya M., Silverman J., Clarke W. P. A methanotroph-based biorefinery: potential scenarios for generating multiple products from a single fermentation // Bioresour. Technol. 2016. V. 215. P. 314–323.
  15. Tollefson J . Scientists raise alarm over “dangerously fast” growth in atmospheric methane // Nature. 2022. https://doi.org/10.1038/d41586-022-00312-2

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Кривые роста штаммов MIR/pAWP-Pphac (1) и MIR/pAWP-pepc (2).

Скачать (16KB)
3. Рис. 2. Накопление аминокислот клетками штаммов MIR/pAWP-Pphac (1) и MIR/pAWP-pepc (2). Бары представляют стандартное отклонение для трех независимых экспериментов. Для определения статистической значимости различий использовали тест Стьюдента; *p < 0.05.

Скачать (18KB)

© Российская академия наук, 2024

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».