Отправить статью по E-mail Дисперсия хроматина сперматозоидов быков-производителей в зависимости от возраста
- Авторы: Иолчиев Б.С.1, Шмидт А.В.2, Луконина О.Н.1, Мороз Т.А.1, Машталер Д.В.1, Комбарова Н.А.3, Ушакова С.Н.1, Приданова И.Е.1
-
Учреждения:
- Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела
- Российский университет дружбы народов
- Головной центр по воспроизводству сельскохозяйственных животных
- Выпуск: Том 107, № 4 (2024)
- Страницы: 255-265
- Раздел: Физиология животных
- URL: https://journal-vniispk.ru/2658-3135/article/view/278519
- DOI: https://doi.org/10.33284/2658-3135-107-4-255
- ID: 278519
Цитировать
Полный текст
Аннотация
В статье представлены результаты исследования взаимосвязи показателей, характеризующих качество спермы быков-производителей и их возраста. Исследуемая выборка быков-производителей была разделена на три группы. В I группу вошли животные до 24 месяцев, во II – от 24 до 60 месяцев, в III – более 60 месяцев. В I группе средний возраст быков-производителей составил 21,8 месяца, во II – 48,9 месяца, в III – 74 месяца. Результаты многомерного дисперсионного анализа свидетельствуют о статистически значимом влиянии возраста быков-производителей на содержание прогрессивно подвижных сперматозоидов в заморожено-оттаянном семени (F=4,25, P≤0,05). У взрослых быков-производителей 48,3±1,13 % сперматозоидов имели прямолинейное поступательное движение, что на 12,74 % больше, чем у молодых животных. В жгутиках сперматозоидов, по сравнению с другими сегментами, наиболее часто встречаются патологии. На их долю приходится 56,46 % от общего количества аномальных гамет. У быков I группы частота встречаемости патологий в строении головки составляет 32,18 % от всей патологии, что больше, чем в других возрастных группах. Минимальное значение частоты встречаемости аномальных сперматозоидов установлено в образцах биоматериала II группы. Максимальный уровень фрагментации яДНК был обнаружен у быка-производителя в возрасте 14 месяцев и составил 13,8 %, минимальный – у быка в возрасте 49 месяцев.
Полный текст
Введение.
Уровень воспроизводства стада является одним из основных показателей, отражающих эффективность организационно-экономической деятельности предприятий, занимающихся разведением сельскохозяйственных животных, в частности крупного рогатого скота (Багиров В.А. и др., 2012; Menon A. G. et al., 2011). Важнейшим элементом вспомогательной репродуктивной технологии является искусственное осеменение. Данный метод имеет ряд биологических и экономических преимуществ для животноводства, позволяет рационально использовать генетический материал выдающихся производителей (Абилов А.И. и др., 2014; Некрасов А.А. и др., 2017; Abah KO et al., 2023; Morgan HL et al., 2020). Использование данного метода позволяет осеменить семенем одного производителя несколько тысяч маток. Это привело к значительному росту требований к оценке при отборе племенных быков-производителей. Особое внимание уделяется спермопродукции, получаемой от быков, она должна отвечать действующему ГОСТу (Панина Е.В. и др., 2019; Иолчиев Б.С. и др., 2018; Четвертакова Е.В. и др., 2020). Репродуктивные способности быков-производителей и качество получаемой спермы зависят от комплекса факторов биотического и абиотического характера (Шмидт А.В. и др., 2024; Henning H et al., 2021). Многочисленные исследования в области репродукции свидетельствуют о влиянии возраста самцов на качественные и количественные показатели спермопродукции (Agus A et al., 2018; Науменкова В.А., 2019). Установлено, что с возрастом уменьшается концентрация сперматозоидов в эякуляте, снижается их подвижность, увеличивается частота встречаемости гамет с патологиями (Kipper BH et al., 2017). Исследования ряда авторов показывают, что объём эякулята от полового созревания до зрелого возраста увеличивается, это, по мнению исследователей, обусловлено развитием дополнительных половых желез, увеличением семенников и массы тела животного. Положительная динамика данного показателя продолжается до четырёхлетнего возраста, и с семилетнего возраста происходит снижение качественных и количественных показателей семени (Murphy EM et al., 2018; Vince S et al., 2018). Ряд исследований подтверждает, что взрослые быки обладают преимуществом над молодыми по подвижности сперматозоидов (Konenda MTK et al., 2020). Эксперименты с участием быков старше восьми лет показывают снижение подвижности половых клеток от зрелого к пожилому возрасту (Trevizan JT et al., 2018). В последнее время большое внимание уделяется целостности ДНК сперматозоидов. Полученные данные демонстрируют высокую корреляцию между индексом фрагментации ДНК и идиопатическим бесплодием. Изучение взаимосвязи индекса фрагментации с фертильностью проводится как в медицине, так и в животноводстве. Для некоторых видов установлено пороговое значение степени повреждённости ДНК: для людей допустимый уровень составляет 30 % (Evenson DP et al., 2002), у жеребцов — 28 %, а у свиней — 6 % (Kumaresan A et al., 2020). Этиология связи между уровнем фрагментации ДНК и возрастом самцов пока недостаточно изучена. Понимание механизма репродуктивного старения может позволить более эффективно использовать генетический потенциал высокоценных производителей.
Цель исследования.
Изучить степень фрагментации ядерной ДНК в сперматозоидах быков-производителей в зависимости от возраста.
Материалы и методы исследования.
Объект исследования. Быки-производители голштинской, симментальской, швицкой, джерсейской пород.
Обслуживание животных и экспериментальные исследования были выполнены в соответствии с инструкциями и рекомендациями нормативных актов: Модельный закон Межпарламентской Ассамблеи государств-участников Содружества Независимых Государств «Об обращении с животными», ст. 20 (постановление МА государств-участников СНГ № 29-17 от 31.10.2007 г.), протоколами Женевской конвенции и принципами надлежащей лабораторной практики (Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р 53434-2009). При проведении исследований были предприняты меры для обеспечения минимума страданий животных и уменьшения количества исследуемых опытных образцов.
Схема эксперимента. Материалом для исследования были образцы заморожено-оттаянной спермы быков-производителей (n=64). В исследуемой выборке возраст быков-производителей в среднем составил 53,6 месяцев. Минимальный возраст – 14 месяцев, максимальный – 101,3 месяца. Условия содержания и состав рациона для всех животных были идентичными. Уровень кормления зависел от живой массы производителей. Для проверки гипотезы о влиянии возраста быков на степень фрагментации ДНК в хроматине сперматозоидов от каждой партии криоконсервированного семени рандомным методом отбирали по три пробы.
Оборудование и технические средства. Исследования выполнены с использованием приборной базы лаборатории биологии воспроизведения сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства. Оценку качества спермы проводили с использованием программного обеспечения Argus-CASA (Argus Soft), состоящего из четырёх модулей: подвижность, морфология, жизнеспособность и фрагментация. Для микроскопического изучения исследуемых образцов использовали микроскоп Zeiss Axiostar plus. С целью исключения субъективизма оценку всех параметров проводили с помощью CASA. Для определения морфологии сперматозоидов проводилась окраска препаратов. Дисперсию ДНК в хроматине половых клеток определяли с помощью SCD-теста (sperm chromatin dispersion test).
Статистическая обработка. Для создания базы данных использовали «Microsoft Excel» («Microsoft», США), для статистического анализа – «SPSS v.23.0. Statistics» («IBM», США). Для проверки гипотезы о влиянии различных факторов на индекс фрагментации ДНК в хроматине сперматозоидов применили общую линейную модель – многомерный анализ. Уровень значимости P≤0,05.
Результаты исследования.
Быки-производители в зависимости от возраста были распределены на три группы:
- I группа – молодые быки-производители, возраст которых не превышал двух лет;
- II группа – взрослые быки старше двух и моложе пяти лет (возраст составил от двух до пяти лет);
- III группа – быки старше пяти лет.
В I группе средний возраст быков-производителей был 21,8 месяца, во II группе – 48,9 месяца, а в III группе – 74 месяца. Результаты многомерного дисперсионного анализа свидетельствуют о статистически значимом влиянии возраста быков-производителей на содержание прогрессивно подвижных сперматозоидов в заморожено-оттаянном семени (F=4,25, P≤0,05). В заморожено-оттаянном семени взрослых быков-производителей 48,31±1,13 % сперматозоидов имели прямолинейное поступательное движение, что на 12,74 % больше, чем у молодых животных, и на 9,12 % – у быков-производителей III группы. Различия между этими группами и между I и III группами не являются статистически значимыми (рис. 1). Достоверная разница между I и III группами установлена по содержанию сперматозоидов с колебательным и манежным движением. У молодых быков сперматозоидов с таким движением оказалось на 3,95 % больше, чем у быков старше 5 лет. В сравнительном аспекте наибольшее содержание неподвижных сперматозоидов наблюдалось в группе быков-производителей, возраст которых в среднем составил 74 месяца. Содержание неподвижных сперматозоидов в исследуемых образцах данной группы в среднем составило 43,31±1,72 %, что на 5,91 абсолютных процента больше, чем у быков-производителей II группы.
Рисунок 1. Содержание сперматозоидов разной категории в зависимости от возраста быков-производителей
Figure 1. Content of spermatozoa of different categories depending on the age of stud bulls
В исследуемых образцах частота встречаемости сперматозоидов с анормальной морфологией в среднем составила 5,85±0,4 %, что в три раза меньше допустимой нормы по ГОСТ 26030-2015.
В сравнительном аспекте наибольшее число сперматозоидов с патологиями отдельных сегментов обнаружено в образцах быков-производителей III группы и составило 7,48±0,16 %. Разница между группами по частоте встречаемости патологических сперматозоидов не является статистически значимой.
В исследуемых образцах независимо от возраста в структуре распределения встречаемости патологии в отдельных сегментах достоверная разница в зависимости от возраста между группами не установлена. В среднем, наиболее часто встречается патология в жгутиках половых клеток (табл. 1).
Таблица 1. Распределение патологии в сегментах сперматозоидов быков-производителей
Table 1. Distribution of pathology in sperm segments of stud bulls
Сегмент локализации патологии от общего числа сперматозоидов с патологией / Segment of pathology localization from the total number of spermatozoa with pathology | Группы в зависимости от возраста, лет/ Groups depending on age, years | ||
≤2 | 2-5 | ≥5 | |
Головка, % / Head, % | 32,18±3,61 | 30,52±2,18 | 31,24±2,96 |
Средняя часть, % / Middle part, % | 12,32±1,82 | 11,57±1,45 | 11,28±1,63 |
Жгутик, % / Flagellum, % | 54,96±3,54 | 57,41±4,61 | 57,01±3,87 |
Полиморфизм тератозооспермия / Polymorphism teratozoospermia | |||
Головка +средняя часть, %/ Head+ Middle part, % | 0,14±0,02 | 0,11±0,01 | 0,19±0,02 |
Головка +жгутик, % / Head+Flagellum, % | 0,27±0,01 | 0,25±0,01 | 0,22±0,01 |
Средняя часть+жгутик, % / Middle part + Flagellum, % | 0,11±0,01 | 0,14±0,01 | 0,05±0,00 |
Головка+средняя часть +жгутик, % / Head+Middle part+ Flagellum, % |
0,02±0,00 |
- |
0,01±0,00 |
Сегмент, в котором наиболее часто встречались аномалии строения во всех группах – это жгутик. На его долю приходится 56,46 % от общего количества сперматозоидов с патологиями.
Патология строения головки сперматозоида имеет особое значение, так как наследственный материал сосредоточен именно в этом сегменте. Существует гипотеза, что одной из многочисленных причин фрагментации ядерной ДНК сперматозоида является деформация головки. В популяции аномальных сперматозоидов на долю патологии этого сегмента приходится 31 %. Минимальное значение установлено в образцах II группы, максимальное – в I группе, разница между группами не является достоверной. Сочетание двух и более патологий встречалось крайне редко, во всех группах оно не превышало 0,27 %.
Методом SCD-теста определяли дисперсию хроматина в сперматозоидах быков-производителей.
В исследуемых выборках уровень фрагментации яДНК в среднем составил 10,44 % с коэффициентом вариации 58,6 %. Максимальный уровень фрагментации яДНК (13,8 %) был обнаружен у быка-производителя в возрасте 16 месяцев, минимальный (1,8 %) – у быка в возрасте 49 месяцев. Результаты дисперсионного анализа опровергают нулевую гипотезу о взаимосвязи между возрастом быков-производителей и степенью фрагментации яДНК.
Рисунок 2. Индекс фрагментации яДНК в зависимости от возраста быков-производителей
Figure 2. DNA fragmentation index depending on the age of stud bulls
Обсуждение полученных результатов.
Изучение взаимосвязи качественных и количественных показателей спермы быков-производителей с их возрастом показало влияние возраста на морфологию половых клеток. Сила влияния возраста быков на частоту встречаемости патологий в строении головок была равна 24 % (Р≤0,05), а жгутика – 37 % (Р≤0,01). На общее количество патологических форм сперматозоидов пришлось 59 % (Р≤0,001) (Бойко Е.В. и др., 2019). Результаты исследования связи структуры хроматина сперматозоидов с возрастом животных показали, что как у молодых, так и у старых быков были более высокие показатели индекса фрагментации по сравнению с быками 2-7 лет. Научные данные о влиянии возраста на индекс фрагментации ДНК хроматина в сперме быков-производителей противоречивы. Одни авторы сообщают о высокой фрагментации ДНК сперматозоидов взрослых быков, другие, напротив, утверждают, что не обнаружили статистически достоверной разницы по индексу фрагментации ДНК в сперматозоидах в зависимости от возраста быков-производителей (Karabinus DS et al., 1990; Fortes MRS et al., 2012; HallapT et al., 2005). Снижение биологической полноценности спермы с возрастом обусловлено рядом факторов, к которым относятся снижение антиоксидантных свойств спермы и гипофункция половых желёз (Carreira JT et al., 2017). Данные о влиянии возраста на качественные и количественные параметры спермы быков-производителей также носят противоречивый характер.
Заключение.
Таким образом, результаты исследований показывают, что возраст быков-производителей оказывает статистически значимое влияние на характер движения и индекс фрагментации ядерной ДНК (яДНК) сперматозоидов.
Об авторах
Байлар С. Иолчиев
Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела
Автор, ответственный за переписку.
Email: baylar1@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-5386-7263
доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник
Россия, Московская область, Лесные ПоляныАнна В. Шмидт
Российский университет дружбы народов
Email: anna74@list.ru
ORCID iD: 0000-0002-8108-7149
кандидат сельскохозяйственных наук, доцент кафедры
Россия, МоскваОльга Н. Луконина
Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела
Email: lukoninaon@mail.ru
ORCID iD: 0009-0004-5369-6555
кандидат сельскохозяйственных наук, врио директора
Россия, Московская область, Лесные ПоляныТатьяна А. Мороз
Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела
Email: t_moroz_2013@mail.ru
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Россия, Московская область, Лесные ПоляныДмитрий В. Машталер
Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела
Email: mashtaler-1989@mail.ru
кандидат биологических наук
Россия, Московская область, Лесные ПоляныНина А. Комбарова
Головной центр по воспроизводству сельскохозяйственных животных
Email: komnina@list.ru
ORCID iD: 0000-0003-3861-4465
кандидат биологических наук, главный технолог
Россия, пос. Быково, Московская областьСветлана Н. Ушакова
Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела
Email: ob-vniiplem@yandex.ru
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Россия, Московская область, Лесные ПоляныИрина Е. Приданова
Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела
Email: irinapridanova@yandex.ru
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Россия, Московская область, Лесные ПоляныСписок литературы
- Бойко Е.В., Коропец Л.А. Морфологические показатели спермы быков-производителей мясных пород // Современные достижения и проблемы генетики и биотехнологии в живот-новодстве: материалы междунар. науч. конф. (24 сентября-01 октября, Дубровицы 2019 г.). Дубровицы 2019. С. 26-31. [Boiko EV, Koropets LA. Morphological indicators of sperm of bull-sires of beef breeds (Conference proseedings) Modern achievements and problems of genetics and biotechnology in animal husbandry: Proceedings of the international scientific conference. (Sep-tember 24-October 1, Dubrovitsy, 2019). Dubrovitsy; 2019:26-31.
- Митохондриальная дисфункция и активность сперматозоидов быков / Б.С. Иолчиев, С.М. Борунова, О.Э. Бадмаев, Р.Б. Иолчиев, А.В. Таджиева // Вестник Алтайского государствен-ного аграрного университета. 2018. № 3(161). С. 118-122. [Iolchiev BS, Borunova SM, Badmaev OE, Iolchiyev RB, Tadzhiyeva AV. Mitochondrial dysfunction and sperm activity in bulls. Bulletin of Altai State Agricultural University. 2018;3(161):118-122. (In Russ.)].
- Науменкова В.А. Качество криоконсервированной спермы жеребцов в зависимости от воз-раста // Современные достижения и актуальные проблемы в коневодстве: сб. докладов меж-дунар. науч.-практ. конф., (Дивово, 14 июня 2019 г.). Дивово: ВНИИ коневодства, 2019. С. 190-195. [Naumenkova_ VA. The quality of cryoconservated semen of stallions depending on the age (Conference proseedings) Sovremennie dostijeniya i aktualnie problem v konevodstve: sb. Dokladov mejdunar. nauch.-praktich. konf., (Divovo, 14 iyunya 2019 g.). Divovo: VNII kon-evodstva; 2019:190-195. (In Russ.)]. doi: 10.25727/HS.2019.1.35388
- Некрасов А.А., Попов Н.А., Иолчиев Б.С. Влияние биологической полноценности спермы быков-производителей канадской селекции на репродуктивные показатели коров отдельно-го стада // Аграрная Россия. 2017. № 2. С. 18-21. [Nekrasov AA, Popov NA, Iolchiev BS. Influ-ence of the biological value of sperm of bulls of canadian breeding on the reproductive performance of cows in individual herds. Agrarnaya Rossiya (Agrarian Russia). 2017;2:18-21. (In Russ.)].
- Панина Е.В., Петров Д.В., Сытник С.Г. Влияние возрастного фактора на качество спермы быков голштинской породы //Доклады ТСХА: cб. статей. М: Изд-во РГАУ-МСХА. 2019. Вып. 291. Ч. V. С. 264-268. [Panina EV, Petrov DV, Sitnik SG. Vliyanie vozrastnogo faktora na kachestvo spermi bikov golshtinskoi porodi. Doklady TSHA: cb. statej. Moscow: Izdatelstvo RGAU-MSHA. 2019;291(V):264-268. (In Russ.)].
- Роль репродуктивных биотехнологий в воспроизводстве и сохранении генофонда редких и исчезающих пород крупного рогатого скота / В.Ю. Бабенков, Н.В. Чимидова, А.И. Хах-линов, А.В. Убушиева, В.И. Манжиев // Животноводство и кормопроизводство. 2023. Т. 106. № 1. С. 67-76. [Babenkov VYu, Chimidova NV, Khakhlinov AI, Ubushieva AV, Manjiev VI. The role of reproductive biotechnologies in the reproduction and preservation of the gene pool of rare and endangered breeds of cattle. Animal Husbandry and Fodder Production. 2023;106(1):67-76. (In Russ.)]. https://doi.org/10.33284/2658-3135-106-1-67
- Спермопродукция у быков-производителей современной селекции при разной обеспечен-ности макро- и микроэлементами / А.И. Абилов, Г.В. Ескин, Х.А. Амерханов, Н.А. Комба-рова, И.С. Турбина, Е.В. Федорова, И.В. Гусев, Н.В. Жаворонкова // Сельскохозяйственная биология. 2014. № 6. С. 96-106. [Abilov AI, Eskin GV, Amerkhanov KhA, Kombarova NA, Tur-bina IS, Fedorova EV, Gusev IV, Zhavoronkova NV. High sperm production as related to macro- and microelement levels in blood serum in servicing bulls of the modern selection. Sel’skokhozyaistvennaya Biologiya [Agricultural Biology]. 2014;6:96-106. (In Russ.)]. doi: 10.15389/agrobiology.2014.6.96rus doi: 10.15389/agrobiology.2014.6.96eng
- Фертильность сперматозоидов и состояние хроматина: методы контроля (обзор) / В.А. Баги-ров, В.П. Кононов, Б.А. Иолчиев, П.М. Кленовицкий, Л.К. Эрнст // Сельскохозяйственная биология. 2012. № 2. С. 3-13. [Bagirov VA, Kononov VP, Iolchiev BA, Klenovitskii PM, Ernst LK. Chromatin status as the index of spermatozoa valuable: the tests for estimation. Sel’skokhozyaistvennaya Biologiya [Agricultural Biology]. 2012;2:3-13. (In Russ.)].
- Четвертакова Е.В., Лущенко А.Е. Спермопродукция быков как показатель их адаптацион-ной способности // Вестник КрасГАУ. 2020. № 6(159). С. 144-149. [Chetvertakova EV, Lus-chenko AE. Sperm production of bulls as an indicator of their adaptive ability. Bulletin of KSAU. 2020;6(159):144-149. (In Russ.)]. doi: 10.36718/1819-4036-2020-6-144-149
- Шмидт А.В., Иолчиев Б.С., Онкорова Н.Т. Изучение биологической полноценности спер-матозоидов в сперме с бактериальной обсемененностью // Вестник КрасГАУ. 2024. № 6(207). С. 101-108. [Shmidt AV, Iolchiev BS, Onkorova NT. Studying the biological completeness of sperm in semen with bacterial contamination. Bulletin of KSAU. 2024;6(207):101-108. (In Russ.)]. doi: 10.36718/1819-4036-2024-6-101-108
- Abah KO et al. Effect of male age on semen quality in domestic animals: potential for advanced functional and translational research? Veterinary Research Communications. 2023;47(3):1125-1137. doi: 10.1007/s11259-023-10159-1
- Agus A, Tri Satya Mastuti Widi. Current situation and future prospects for beef cattle production in Indonesia — A review. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences (AJAS). 2018;31(7): 976-983. doi: 10.5713/ajas.18.0233
- Carreira JT et al. Does sperm quality and DNA integrity differ in cryopreserved semen samples from young, adult, and aged Nellore bulls? Basic and Clinical Andrology. 2017;27:12. doi: 10.1186/s12610-017-0056-9
- Evenson DP, Larson KL, Jost LK. Sperm chromatin structure assay: its clinical use for detecting sperm DNA fragmentation in male infertility and comparisons with other techniques. Journal of Andrology. 2002;23(1):25-43. doi: 10.1002/j.1939-4640.2002.tb02599.x
- Fortes MRS et al. The integrity of sperm chromatin in young tropical composite bulls. Theriogenol-ogy. 2012;78(2):326-33, 333.e1-4. doi: 10.1016/j.theriogenology.2012.02.007
- Hallap T et al. Sperm chromatin stability in frozen-thawed semen is maintained over age in AI bulls. Theriogenology. 2005;63(6):1752-1763. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.08.001
- Henning H, Luther A-M, Waberski D. A high incidence of sperm with cytoplasmic droplets affects the response to bicarbonate in preserved boar semen. Animals (Basel). 2021;11(9):2570. doi: 10.3390/ani11092570
- Karabinus DS et al. Comparison of semen quality in young and mature Holstein bulls measured by light microscopy and flow cytometry. Journal of Dairy Science. 1990;73(9):2364-2371. doi: 10.3168/jds.S0022-0302(90)78919-9
- Kipper BH et al. Sperm morphometry and chromatin condensation in Nelore bulls of different ages and their effects on IVF. Theriogenology. 2017;87:154-160. doi: 10.1016/j.theriogenology.2016.08.017
- Konenda MTK et al. Seasonal variation and age-related changes in semen quality of Limousin bull in Indonesian artificial insemination center. Int J Ver Sci. 2020;9(4):553-557.
- Kumaresan A et al. Sperm DNA integrity and male fertility in farm animals: a review. Frontiers in Veterinary Science. 2020;7:321. doi: 10.3389/fvets.2020.00321
- Menon AG, Barkema HW, Wilde R, Kastelic JP, Thundathil JC. Associations between sperm ab-normalities, breed, age, and scrotal circumference in beef bulls. Canadian Journal of Veterinary Re-search. 2011;75(4):241-247.
- Morgan HL et al. Defining the male contribution to embryo quality and offspring health in assisted reproduction in farm animals. Animal Reproduction. 2020;17(3):e20200018. doi: 10.1590/1984-3143-AR2020-0018
- Murphy EM et al. Influence of bull age, ejaculate number, and season of collection on semen pro-duction and sperm motility parameters in Holstein Friesian bulls in a commercial artificial insemina-tion centre. Journal of Animal Science. 2018;96(6):2408-2418. doi: 10.1093/jas/sky130
- Trevizan JT et al. Does lipid peroxidation and oxidative DNA damage differ in cryopreserved se-men samples from young, adult and aged Nellore bulls? Animal Reproduction Science. 2018;195:8-15. doi: 10.1016/j.anireprosci.2018.04.071
- Vince S et al. Age-related differences of semen quality, seminal plasma, and spermatozoa antioxi-dative and oxidative stress variables in bulls during cold and warm periods of the year. Animal. 2018;12(3):559-568. doi: 10.1017/S1751731117001811
Дополнительные файлы
