Том 66, № 3 (2021)

Обложка

Весь выпуск

ЮБИЛЕЙНЫЕ ДАТЫ

К 90-летнему юбилею академика РАН Дмитрия Константиновича Львова*

Редакционная с.

Аннотация

Статьи опубликованы на русском и английском языках на сайте журнала: https://virusjour.elpub.ru/jour

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):173-181
pages 173-181 views

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Маркёры вирусного гепатита Е (Hepeviridae, Orthohepevirus, Orthohepevirus A )у импортированных низших обезьян Старого Света

Догадов Д.И., Корзая Л.И., Кюрегян К.К., Карлсен А.А., Михайлов М.И.

Аннотация

Введение. Вирусный гепатит Е – зооантропонозное заболевание, встречающиеся у людей и различных животных, в том числе у обезьян. Оно вызывается вирусом гепатита Е (ВГЕ) (Hepeviridae, Orthohepevirus: Orthohepevirus A), для которого на сегодняшний день описано 8 генотипов. Среди них штаммы генотипов 1 и 2 выделены от человека, 3 и 4 – от человека и животных, а 5–8 – только от животных. Основная опасность болезни заключается в том, что для вирусов 3, 4, 7 и 8 генотипических вариантов к настоящему времени доказана зоонозная передача человеку через заражённое мясо, кровь и молоко. Таким образом, возможно вовлечение обезьян в цепь передачи встречающегося у них ВГЕ.

Целью настоящей работы явилось изучение серологических и молекулярно-генетических маркёров вирусного гепатита Е у низших обезьян (мартышковые, Cercopithecoidea), импортированных в Адлерский приматологический центр из различных регионов мира (Танзания, Вьетнам, Маврикий).

Материал и методы. Образцы фекалий (n = 224) и сывороток крови (n = 395) от макак яванских (Macaca fascicularis) и зеленых мартышек вервет (Chlorocebus pygerythrus) изучены с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ).

Результаты и обсуждение. Полученные данные свидетельствуют о высокой частоте (51,8%) обнаружения антител (АТ) класса G к ВГЕ среди 5 групп макак яванских, импортированных из Вьетнама, с преобладанием высокореактивных сывороток (84%). Обращает на себя внимание выявление АТ класса M у этих животных (10,4%) в одной из групп с большим количеством подобных сывороток (36,8%). Особую значимость представляет факт выделения в 2 группах макак яванских вирусной РНК (11,9 и 5,7%). Все выделенные от обезьян последовательности принадлежали к 4 генотипу ВГЕ.

Заключение. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что обезьяны (в частности, макаки яванские) могут служить естественным резервуаром ВГЕ генотипа 4 для человека. Это требует проведения в ряде ситуаций соответствующего комплекса противоэпидемических мероприятий.

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):182-188
pages 182-188 views

Моноклональные антитела к гемагглютинину вируса гриппа А/Н7N3 (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus: Influenza A virus)

Сорокин Е.В., Царёва Т.Р., Руднева И.А., Тимофеев Б.И., Ляшко А.В., Баланова М.А., Артёмов Е.К., Гребенникова Т.В., Тимофеева Т.А.

Аннотация

Введение. Варианты вируса гриппа (ВГ) А подтипа Н7, как и Н5, обладают высоким пандемическим потенциалом. Однако имеющиеся сведения об антигенной структуре гемагглютинина (HA) Н7 значительно уступают по объёму аналогичным данным в отношении НА подтипа Н5.

Цели исследования – разработка и характеристика панели моноклональных антител (МКАТ), направленных к НА подтипа Н7 возбудителя гриппа А.

Материал и методы. Культуру вируса накапливали в 10-дневных куриных эмбрионах. Очистку и концентрацию вирусных частиц, определение концентрации белка, получение МКАТ и асцитных жидкостей, реакцию гемагглютинации (РГА) и реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), оценку активности антител в непрямом иммуноферментном анализе (ИФА), а также определение изотипов МКАТ и реакцию нейтрализации (РН) проводили стандартными способами.

Результаты. Полученные МКАТ к штамму А/mallard/Netherlands/12/2000 (H7N3) исследованы в РТГА с набором штаммов разных лет выделения, относящихся к различным эволюционным группам. Во всех случаях антитела обладали сниженной реакционной способностью по сравнению с вирусом-иммуногеном. Выявлено перекрёстное взаимодействие МКАТ 9E11 и 9G12 в РТГА с ВГ А/H15.

Обсуждение. Возбудитель гриппа А с НА подтипа Н7 может послужить потенциальным агентом будущей пандемии. Разработка панели МКАТ к НА этого подтипа представляется актуальной задачей как для ветеринарии, так и для общественного здравоохранения.

Заключение. Полученные нами антитела могут найти применение не только для эпитопного картирования НA подтипа вируса Н7 (которое к настоящему времени недостаточно разработано) и в качестве реагентов тест-систем, но и с целью определения общих («универсальных») эпитопов в данной молекуле у разных штаммов Н7.

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):189-197
pages 189-197 views

Экспрессия эндотелиальных факторов в клетках эндотелия человека при инфекции, вызванной вирусом гриппа А(H1N1)pdm09 (Orthomyxoviridae; Alphainfluenzavirus)

Марченко В.А., Барашкова С.В., Зелинская И.А., Торопова Я.Г., Рэмзи Э.С., Жилинская И.Н.

Аннотация

Введение. Вирус гриппа (ВГ) А (Orthomyxoviridae; Alphainfluenzavirus) способен вызывать дисфункцию эндотелия (ДЭ), апоптоз эндотелиоцитов, а также влиять на экспрессию эндотелиальных факторов, поддерживающих сосудистый гемостаз. В то же время воздействие этого патогена на характер экспрессии ключевых факторов эндотелия до настоящего времени неизвестно.

Цель исследования – выявить изменения экспрессии эндотелиальной синтазы оксида азота (NO) (eNOS) и ингибитора активатора плазминогена 1 (PAI-1, или serpin E1) в инфицированных ВГ А эндотелиоцитах. Задачи работы: изучение экспрессии указанных факторов в клетках эндотелия, инфицированных вирусом А(H1N1)pdm09; установление наличия гомологичных фрагментов в белках исследуемого патогена и эндотелиальных факторах.

Материал и методы. В экспериментах использовали клеточную линию эндотелия человека EA.hy926, которую инфицировали ВГ А/Санкт-Петербург/48/16 (H1N1)pdm09. Детекцию уровня экспрессии эндотелиальных факторов в динамике (6, 12, 18, 24, 48 и 72 ч) выполняли иммуноцитохимическим методом (ИЦХ) с помощью антител (АТ) к eNOS и PAI-1. Для количественной оценки полученного сигнала использовали программу Nis-Elements F3.2 («Nikon», Япония). Поиск гомологичных последовательностей в структуре вирусных белков и молекул eNOS и PAI-1 осуществляли путём компьютерного сравнения в них фрагментов длиной 12 а.о.

Результаты и обсуждение. Экспрессия eNOS в инфицированных клетках уменьшалась от 7,9% через 6 ч до 3,3% спустя 72 ч (контроль принят за 100%). Уровень экспрессии PAI-1 на протяжении исследования значительно варьировал: через 6 ч его показатель снижался до 49,6%, через 18 ч – возрастал до 116,3% с последующим резким падением до 18,9% спустя 24 ч. Через 48 ч и 72 ч выраженность экспрессии составляла 23,5 и 35% соответственно. В ряде белков исследуемого вируса обнаружены последовательности, гомологичные фрагментам eNOS и PAI-1.

Заключение. В ходе эксперимента с инфицированием клеток эндотелия ВГ А установлено, что вирус вызывает выраженное снижение экспрессии eNOS и модулирует экспрессию PAI-1. Описанное явление может быть использовано при дальнейшей разработке направлений патогенетической терапии сосудистых осложнений инфекции, вызываемой данным возбудителем.

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):198-210
pages 198-210 views

Геномные изменения вируса африканской чумы свиней (Asfarviridae: Asfivirus: African swine fever virus), связанные с адаптацией к размножению в перевиваемой культуре клеток

Мазлум А.А., Иголкин А.С., Зиняков Н.Г., ван Шалквик А., Власова Н.Н.

Аннотация

Введение. Возбудитель африканской чумы свиней (Suidae) (АЧС) – крупный (175–215 нм) двухцепочечный ДНК-вирус, относящийся к семейству Asfarviridae. К настоящему времени секвенирован и подробно проанализирован только геном штамма BA71V, адаптированного к клеточной культуре Vero.

Целью данной работы явился сравнительный анализ полногеномного сиквенса исходного изолята вируса АЧС Odintsovo 02/14 и 2 штаммов, полученных на уровне 30 и 50 пассажей и адаптированных к росту в клеточной культуре CV-1.

Материал и методы. В работе использованы различные варианты вируса АЧС: исходный изолят Odintsovo 02/14 и 2 штамма адаптированного вируса: ASFV/ARRIAH/CV-1/30 и ASFV/ARRIAH/CV-1/50. Библиотеку последовательностей конструировали с использованием набора «Nextera XT DNA library preparation kit» («Illumina», США).

Результаты. Длина геномов штаммов ASFV/ARRIAH/CV-1/30 и ASFV/ARRIAH/CV-1/50 составила 186 529 и 186 525 п.н. соответственно. Всего между исходным и адаптированными вариантами обнаружены 78 однонуклеотидных полиморфизмов (single nucleotide polymorphisms, SNP); кроме того, установлено наличие крупноразмерной делеции величиной 2947 п.н. в правом (3’-концевом) вариабельном регионе у обоих адаптированных штаммов.

Обсуждение. Возбудитель АЧС как ДНК-содержащий вирус может не иметь высокого мутационного статуса. Однако в данном исследовании повторно установлено, что адаптация этого инфекционного агента к росту в перевиваемой культуре клеток (КК) приводит к появлению крупноразмерной делеции в 3’-вариабельной области генома.

Заключение. В связи с недостаточной изученностью данной проблемы необходимо проведение дополнительных исследований, что позволит подтвердить имеющиеся данные относительно влияния каждой из описанных мутаций на характер размножения вируса и степень его вирулентности.

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):211-216
pages 211-216 views

Распространённость вируса папилломы человека (Papillomaviridae; Human papillomavirus) высокого канцерогенного риска по результатам скрининга 3 анатомических локусов у мужчин, стратифицированных по сексуальному поведению и ВИЧ-статусу

Попова А.А., Домонова Э.А., Покровская А.В., Шипулина О.Ю., Покровский В.В.

Аннотация

Введение. Вирус папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР) является этиологическим агентом рака шейки матки, а также оказывает влияние на развитие рака ануса, влагалища, полового члена, вульвы и ротоглотки. В связи с этим дальнейшее изучение биологических свойств этого агента и частоты его встречаемости в различных популяциях представляет собой актуальную задачу.

Цель исследования: установить распространённость ВПЧ ВКР при скрининге 3 анатомических локусов у мужчин, стратифицированных по сексуальному поведению (мужчины, практикующие секс с мужчинами (МСМ); гетеросексуальные мужчины (ГМ)), а также по ВИЧ-статусу (негативный/позитивный).

Материал и методы. Обследованы 256 лиц мужского пола, проживающих в Московском регионе, с различными сексуальным поведением и ВИЧ-статусом. Всем выполнено тестирование, направленное на обнаружение ВПЧ 14 генотипов (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68). С целью детекции ДНК ВПЧ ВКР в соскобах из уретры, ануса и мазках из ротоглотки применялся метод полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ). Во всех случаях определялось абсолютное значение СD4+ лимфоцитов в периферической крови методом проточной цитометрии. У обследуемых с ВИЧ-позитивным статусом дополнительно проводилось определение РНК ВИЧ в крови посредством ПЦР-РВ.

Результаты. Распространённость инфекции, вызываемой ВПЧ ВКР, среди обследуемых составила 54,7%. Наибольшая частота выявления ВПЧ ВКР по 3 исследованным локусам зафиксирована в группе ВИЧ-позитивных МСМ (82,2%), а наименьшая – у гетеросексуалов с ВИЧ-отрицательным статусом (20,3%). При этом ВПЧ ВКР в соскобе из уретры чаще обнаруживался у ВИЧ-позитивных ГМ (24,0%); в соскобе из ануса и мазке из ротоглотки – в группе ВИЧ-положительных МСМ (79,5 и 13,7% соответственно). Показатель распространённости вируса различных генотипов значительно варьировал в зависимости от анатомического локуса, ВИЧ-статуса и сексуального поведения.

Обсуждение. Впервые получены данные по распространённости ВПЧ ВКР у мужчин с различным сексуальным поведением и ВИЧ-статусом в Московском регионе.

Заключение. Проведение в мужской популяции скрининга на ВПЧ ВКР, основанного на выявлении 14 генотипов вируса в 3 анатомических локусах (уретра, ротоглотка, анус) методом ПЦР-РВ, позволит получить информацию, необходимую для совершенствования системы эпидемиологического мониторинга и рационального планирования профилактических мероприятий среди лиц мужского пола, имеющих любой из факторов риска персистенции папилломавирусной инфекции (наличие ВИЧ-инфекции и/или отношение к группе МСМ).

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):217-226
pages 217-226 views

Экспрессия интегринов β1, α4 и молекулы клеточной адгезии ICAM-1 в присутствии дезоксирибонуклеата натрия с железом комплекса (ДНК-Na-Fe) клетками МТ-4, трансформированными Т-лимфотропным вирусом человека 1 типа (Retroviridae: Orthoretrovirinae: Deltaretrovirus: Human T-lymphotropic virus type 1)

Калнина Л.Б., Селимова Л.М., Каплина Э.Н., Носик Д.Н.

Аннотация

Введение. Важная роль интегринов (ИГ) в возникновении и развитии онкологических процессов делает данные структуры удобными мишенями для разработки иммуномодулирующих терапевтических препаратов, оказывающих воздействие непосредственно на эти молекулы. Среди последних выделяются ИГ β1, α4 и рецептор клеточной адгезии ICAM-1 (intercellular adhesion molecule 1). Иммуномодуляторы способны посредством неспецифических механизмов изменять активность ИГ, что, однако, в ряде случаев может служить причиной снижения защитных функций иммунной системы и ухудшения состояния здоровья человека.

Цель исследования – установление влияния на выраженность клеточной экспрессии и характер метаболизма ИГ препарата дезоксирибонуклеат натрия с железом комплекс – ДРК-Na-Fe, используемого в Российской Федерации в качестве иммуномодулирующего средства, детали действия которого тем не менее изучены недостаточно.

Материал и методы. В работе использовали 2 варианта неопластической клеточной линии CD4+ Т-лимфоцитов, трансформированных Т-лимфотропным вирусом человека 1 типа (ТЛВЧ-1; human T-lymphotropic virus 1, HTLV-1) семейства Retroviridae, – МТ-4 (МТ-4/1 и МТ-4/2). Указанные варианты характеризовались различной выраженностью экспрессии белковых маркёров активации CD28 и CD38. После культивирования клеточной культуры в присутствии 500 мкг/мл ДНК-Na-Fe изучали уровни экспрессии ИГ β1 (CD29), α4 (CD49d) и ICAM-1 (CD54) методом проточной цитометрии.

Результаты. Практически все клетки обеих линий имели мембранные белки СD29+ (90,4% ± 4,5), CD54+ (97,9% ± 1,4), а также незначительное количество CD49d+ (1,9% ± 1,0). В присутствии препарата различий в экспрессии исследуемых белков на клеточной поверхности не наблюдалось.

Обсуждение. Степень экспрессии ИГ β1, α4 и ICAM-1 может служить одной из фенотипических характеристик клеток МТ-4. Полученные данные имеют существенное значение, так как особенности трансформации СD4+ T-лимфоцитов и их метаболизма при инфицировании ТЛВЧ-1 до настоящего времени недостаточно изучены.

Заключение. Результаты настоящей работы могут быть полезны как при установлении патогенеза заболеваний, вызываемых ТЛВЧ-1, некоторых видов злокачественных новообразований, так и для поиска новых специфически действующих фармакологических веществ, в т.ч. молекулярно-нацеленных (таргетных). Представляется, что итоги исследования помогут расширить существующие представления о маркёрах клеточной линии МТ-4.

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):227-232
pages 227-232 views

НЕКРОЛОГИ

Ханс-Дитер Кленк

Редакционная с.

Аннотация

.

Вопросы вирусологии. 2021;66(3):233-234
pages 233-234 views

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».